中医证候的基因芯片研究近况

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1、中医证候的基因芯片研究近况【摘要】　　用现代科学技术研究中医证候是中医研究的重要课题。文章简要介绍了用基因芯片探讨中医证候本质的研究近况，主要包括肾阳虚证、虚寒证、心阳虚证、肺虚证、脾虚证和寒热证差异基因表达谱的研究，从而为从基因水平上阐释中医证候的本质特征和进一步建立中医证候的基因组学做了有意义的探索。【关键词】中医证候基因芯片生命科学　　近年生命科学最热门的三大领域是基因组研究、细胞凋亡和细胞信号转导。相应地也有三大生物技术给予支持，这就是DNA测序、PCR技术和生物芯片技术。自1991年美国加州旧金山Affymetrix公司创造了世界上第一

2、块DNA芯片、1995年Stanford大学发表第一篇基因表达芯片文章以来，基因芯片技术已广泛地被用于基因功能的研究［1］。基因芯片是生物芯片中应用最广泛、技术最成熟的分支，又叫DNA芯片、DNA微阵列，其是在面积不大的基片表面上以点阵的方式有序排列一系列固定于一定位置的可寻址的识别分子（DNA和RNA片段），并以此作为探针，在一定条件下与样品待测的靶基因片段进行结合或反应，反应结果用同位素法、化学发光法或酶标法显示，然后用精密的扫描仪扫描记录，通过计算机软件分析，综合可读信息，最终实现对靶基因的存在、含量及变异等信息的快速检测。　　1中医证候及

3、其证候基因组　　辨证论治是中医学理论的特点之一，论治取决于辨证。中医的“证”是生命物质在疾病过程中具有时相性的本质反映。“候”的原意则是用以说明事物变化的情状，即所谓的疾病的临床表现。由于中医学对于疾病的认识侧重于整体、宏观、司外揣内，重视疾病某阶段机体的整体状态，辨证论治也即是通过对疾病表现在外的征象，进而推测演绎疾病的病因、病性和病位，由此归纳出证的概念［2］。用现代科技研究中医“证候”是中医研究的重要课题，证候病机及其与疾病和方剂的相关性是证候研究的重要科学问题［3］。中医证候是中医药研究的核心，“证候”本质的研究是中医现代化研究的热点和难

4、点，如能获得突破性进展，必将使中医理论研究取得质的飞跃。应用现代医学理论和分子生物学技术阐明中医“证候”本质是实现中医药现代化的基础和关键，具有重大科学意义。中医“证候”本质研究虽经历几十年至今未能实质性突破，其根本原因在于以前没有一种像基因芯片那样十分有效地研究手段能同时检测许多机体、组织和细胞的变化，并比较变化以识别其规律［4］。中医证候的现代研究从以症状、疾病、组织、细胞等为主体，逐渐发展至分子水平、基因水平，并已由单个基因向多基因，由个别基因向基因组发展，由个别基因研究积累到研究基因表达谱，当今在引入基因芯片技术后，建立起证候的功能基因组

5、表达谱［5］，旨在寻找一些与证候相关的基因，然后根据这些基因与证候的关系密切程度用于证候的基因诊断和疗效评价［6］。从中医理论看，证候的形成是由先天的体质因素和后天的环境因素共同作用的结果，因而对证候的研究可能要绘制3张图谱：基因组图谱、单核苷多态性（SNP）图谱和蛋白质组学图谱。而SNP谱体现了不同人种和同一人种不同个体之间的基因组差异，并决定人类个体体质差异和疾病易感性，也可能是中医禀赋学说的基因组背景。　　2中医证候的基因芯片研究　　2.1肾阳虚证　　倪红梅等［7］对肾阳虚体质青少年差异表达基因的基因芯片研究，选取上海16～24岁青少年15

6、4例进行肾阳虚体质筛查，筛查出6例肾阳虚体质者，男性1例，女性5例，余148例为对照，分别采集两组的外周血，分离白细胞并抽提RNA。基因芯片采用上海博星公司的H80S型，可做人标本的8465点杂交,结果筛选出127条差异基因，其中63条上调基因，64条下调基因，其涉及免疫相关、细胞周期蛋白、发育相关、细胞生长、细胞凋亡相关蛋白、代谢、离子通道、转运蛋白、转录因子，以及信号转导系统。由此说明体质的本质是人体防御免疫功能、自我代偿修复和自我调节的反映，其物质基础是建立在人体各系统形态、机能及代谢活动之上的，其内在机理也是多系统多环节的。谭从娥等［8］

7、对筛选出1例骨关节炎（OA）肾阳虚证行温针治疗（取穴：气海、关元、足三里、内外膝眼、阳陵泉），于治疗前后采集其外周血，做白细胞RNA抽提，以基因芯片研究其治疗前后的基因表达谱。结果：在70条差异表达基因中，上调基因49条，下调基因21条，并对34条基因初步分类分析：与免疫相关基因10条，主要表现为上调。如退火素A1基因（NM-000700），OA早期一些患者滑膜液中可有T细胞浸润，OA晚期某些细胞因子（IL-1,TNF-α）参与局部组织损伤，其与炎症免疫和自身免疫发生有关，致使关节软骨发生退行性变，故认为温针治疗后，免疫相关基因上调，提示温针治疗

8、后可通过调节机体的免疫反应来干预OA的发病过程,还有热休克90KDβ链蛋白1基因（NM-007355）与基础代谢相关的基因5条,如II型