知柏地黄丸质量标准研究

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1、知柏地黄丸质量标准研究【摘要】目的建立知柏地黄丸的质量标准。方法采用TLC法对知柏地黄丸中的山茱萸、牡丹皮、黄柏、知母进行定性鉴别；HPLC法测定知柏地黄丸中山茱萸中马钱苷的含量。结果薄层色谱鉴别专属性强。马钱苷线性关系良好,平均回收率符合规定。结论方法简便快速、结果准确，可有效控制知柏地黄丸的质量。【关键词】知柏地黄丸；薄层色谱法；高效液相色谱法；质量标准知柏地黄丸(浓缩丸)是由山茱萸、黄柏、知母、牡丹皮等8味中药组成的中药成方制剂，具有滋阴降火之功效，临床用于治疗阴虚火旺，潮热盗汗，口干咽痛，耳鸣遗精，小便短赤之症［1］。知柏地黄丸(浓缩丸)收载于卫生部药品标准，原标准项下除了收载的显

2、微鉴别项和常规检查外，无其他检测项目［1］。方中山茱萸具有补益肝肾、涩精固脱等作用，其有效成分马钱苷测定的方法有高效液相色谱法［2～3］，胶束电动毛细管色谱法［4］。为了进一步完善该品种质量标准，本实验建立了高效液相色谱法测定知柏地黄丸中(浓缩丸)的马钱苷的含量测定方法，取得了较为满意的结果。现报道如下。　　1仪器与试药　　1.1试剂与药材薄层色谱用硅胶G、硅胶H、羧甲基纤维素钠（大连海洋化工厂）；丹皮酚对照品（批号：0708-9704），熊果酸对照品（批号：110742-200516），盐酸小檗碱对照品（批号：0713-9906）,菝契皂苷元对照品（批号：11074-200401），马钱

3、苷对照品（批号：11640-200502）均由中国药品生物制品检定所提供,阴性样品由厂家提供。甲醇、乙腈（色谱纯）；知柏地黄丸(河南宛西制药股份有限公司，批号050501,050502,050503)；其它试剂均为AR级。　　1.2仪器岛津LC-2010C高效液相色谱系统（日本岛津公司；包括：真空脱气机，四元梯度泵，自动进样器，DAD二极管阵列检测器），Solution色谱工作站（日本岛津公司）；FA2104电子天平（上海精密仪器科学有限公司）。　　2方法与结果　　2.1薄层色谱鉴别　　2.1.1牡丹皮取本品粉末15g，加入乙醚20ml，超声处理10min，滤过，滤液挥干，残渣加丙酮2ml

4、使溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，加甲醇制成每毫升含1mg的对照品溶液。照薄层色谱法［5］试验,吸取上述两种溶液10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-甲苯-醋酸乙酯-盐酸(16∶8∶2∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5％三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。　　2.1.2黄柏取本品粉末1g，加入甲醇10ml，超声处理15min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每毫升含0.5mg的对照品溶液。照薄层色谱法［5］试验,吸取上述两种溶液1μl，点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-

5、丁酮-甲酸-水(10∶6∶1∶1)为展开剂，置氨蒸气预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。　　2.1.3山茱萸取本品粉末5g，加入醋酸乙酯20ml，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每毫升含1mg的对照品溶液。照薄层色谱法［5］试验,吸取上述两种溶液5μl，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-二氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸(20∶5∶8∶0.1)为展开剂，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色

6、谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。　　2.1.4知母取本品粉末30g，加入乙醚30ml，超声处理10min，滤过，弃去乙醚液，残渣挥尽乙醚后，加乙醇60ml，加热回流1h，滤过，滤液浓缩至20ml，加盐酸2ml，加热回流1h后浓缩至约5ml，加水10ml，加石油醚（60～90℃）振摇提取2次，20ml/次，合并石油醚液，用1％氢氧化钠溶液洗涤2次，20ml/次，再用水洗涤2次，20ml/次，分取石油醚液，蒸干，残渣加石油醚（60～90℃）1ml使溶解，作为供试品溶液。另取菝契皂苷元对照品，加石油醚（60～90℃）制成每毫升含1mg的对照品溶液。照薄层色谱法［5］试验,吸取

7、上述两种溶液10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8％香草醛无水乙醇溶液与硫酸溶液（7→10）的混合溶液(0.5:5)，在100℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。　　2.2含量测定　　2.2.1对照品溶液的制备精密称取马钱苷对照品,加80%甲醇制成每毫升含马钱苷30μg的溶液,即得。　　2.2.2供试品溶液的制备取本品粉