仙鹿健骨汤含药血清对成骨细胞增殖和alp影响的实验研究

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1、仙鹿健骨汤含药血清对成骨细胞增殖和ALP影响的实验研究作者：吴剑静王靖吴云刚沈权【摘要】［目的］观察仙鹿健骨汤含药血清对大鼠成骨细胞增殖和成骨细胞ALP的影响。［方法］取12周龄EM培养液重悬，吹打均匀后，接种到培养瓶中，培养瓶置于37℃，5%CO2孵箱孵育，24h换液，待细胞60%～70%贴壁后，0.25%胰酶消化，本实验所用细胞均为原代培养。　　1.3.4不同稀释比的血清对成骨细胞增殖的影响按细胞密度1×105个/ml加入96孔板，每孔100μl，24h后换5%FCSDMEM培养基，每孔90

2、μl。Ⅰ～Ⅵ组同时分别加入按1∶1、1∶3、1∶7稀释比的含药血清10μl，使其最终稀释比为1∶20、1∶40、1∶80，每种浓度重复4孔，继续培养72h，实验结束前4h加20μl的四唑氮盐（MTT）（5mg/ml），继续在37℃，5%CO2条件下孵育，实验结束后，吸去培养液加甲臜溶解液0.1振摇15min，静置0.5h后，酶标仪检测其吸光度，在波长570nm比色。　　1.3.5不同稀释比的血清对成骨细胞ALP的影响成骨细胞接种密度为1×105个/ml加入96孔板，细胞A1～A12行为空白调零，每

3、孔100μl。加药方法同前，细胞加药后培养72h，培养结束时去除培养液，用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗3遍，加0.1%曲拉通（Triton）X100200μl裂解12h，吹打1min，取50μl细胞裂解液转移至另一96孔板，用PBS液作空白调零。各孔均加碱性磷酸酶检测试剂盒中新鲜配制的底物100μl，37℃孵箱孵育30min，加0.1N的NaOH终止反应。酶标仪检测其吸光度，在波长405nm比色。　　1.4统计学方法实验数据采用SPSS10.0统计软件包进行分析。实验数据以均值±标准差表示,进行O

4、neWayANOVA分析。　　2结果　　2.1仙鹿健骨汤对细胞增殖的影响见表1。成骨细胞的活性各治疗组与模型组比较,空白组、阿法D3组以及仙鹿健骨汤在稀释比为1.0g/ml、2.0g/ml时有显著提高（P<0.05或P<0.01），仙鹿健骨汤的低浓度组,与模型组比较无统计学意义,提示成骨细胞的活性未见明显增高，而中剂量组比低剂量组仙鹿健骨汤能更有效地促进成骨细胞的活性（P<0.05）。　　2.2仙鹿健骨汤对细胞ALP活性的影响见表1。不同浓度仙鹿健骨汤组、空白组、阿法D3组与模

5、型对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)，提示仙鹿健骨汤和阿法D3均可促进成骨细胞ALP活性提高，但组间比较差异无统计学意义。　　3讨论　　成骨细胞和破骨细胞是骨形成与骨重建过程中两个功能相反却又互相依存的细胞，成骨细胞的骨形成与破骨细胞的骨吸收两者间保持动态平衡是骨活动保持正常状态的基础。成骨细胞数量不足或活力低下,不能有效地填充因破骨细胞骨吸收而形成的空腔,久之便造成骨质疏松［1］。因此防治骨质疏松症的关键之一，是提高成骨细胞的增殖能力和分化水平，而促进成骨细

6、胞功能的中药复方是目前防治骨质疏松症的主要途径之一。　　表1不同浓度仙鹿健骨汤对细胞增殖和ALP活性影响的比较（略）　　与模型组比较，*P<0.05,**P<0.01　　仙鹿健骨汤是狄任农主任多年来临床用于治疗OP的经验方。方中以仙灵脾、鹿角胶为君药温肾壮阳；骨碎补、仙茅补肝肾强筋骨，以助增强补肾之功；黄芪、白术益气健脾，以养后天；仙鹤草、当归养血活血。诸药合用共收补肾健脾活血之功，使肾精得充，骨筋濡养有渠。本实验结果表明去势大鼠成骨细胞增殖率较正常大鼠明显降低，而中高浓度的仙鹿健骨汤

7、可促进成骨细胞的增殖，但不存在成骨细胞增殖与药物剂量呈比例关系。碱性磷酸酶是参与骨代谢的重要蛋白质,特异性高,被认为是细胞外基质成熟的早期标志［2］，当成骨细胞活动增强时ALP活性升高，实验发现去势大鼠成骨细胞ALP的分泌能力明显降低，仙鹿健骨汤含药血清能促进成骨细胞ALP的分泌，提高ALP活性，从细胞因子水平上阐明了其治疗OP的可能机理。【参考