瑶药葫芦钻提取物抗肿瘤作用的实验研究

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1、瑶药葫芦钻提取物抗肿瘤作用的实验研究作者：黄琳芸，余胜民，钟鸣，潘莉莉，农朝赞，陈少锋，杨增艳【摘要】目的研究葫芦钻提取物的抗肿瘤作用。方法体外抗肿瘤活性研究采用MTT比色法，靶细胞采用人肝癌细胞BLE7404；通过复制小鼠S180，H22腹水瘤和肉瘤动物模型，观察葫芦钻提取物对小鼠平均生命延长率和肿瘤抑制率的影响来评价体内抗肿瘤作用。结果葫芦钻水、醇提取物浓度为20mg/ml时，对体外培养的肿瘤细胞的抑制率均＞50%；葫芦钻水、醇提取物的最大耐受剂量均是150g/kg；经3次实验，葫芦钻水、醇提取物高、低剂量组对S180腹水瘤小鼠平均生命延长率均＞50%，葫芦钻醇提

2、物高剂量组对H22腹水瘤小鼠平均生命延长率＞50%。葫芦钻水、醇提取物高、低剂量组对S180肉瘤小鼠平均瘤重抑制率均＞30%，对H22肉瘤小鼠平均瘤重抑制率均＞50%。结论葫芦钻水、醇提取物具有一定的抗肿瘤作用。【关键词】葫芦钻；抗肿瘤　　Abstract:ObjectiveToinvestigatetheantitumoractivityofYaoHerb--Huluzuan.MethodsTheantitumoractivityinvitroagainsthumancancercelllines--hepatocarcinomaBEL-7404inedbyMTTme

3、thod.TheantitumoractivityinvivoorouseS180、H22solidandascitescarcinomamodelfedonextractedsubstancesfromHuluzuan.Resultserr.的全草，为广西瑶医老班药“五虎、九牛、十八钻、七十二风”之一，瑶族传统治癌“打药”［1］，具有理气止痛，清热解毒的功效。根据民间用药经验，开展抗肿瘤作用实验研究，作者通过体内药效实验和体外药效实验评价葫芦钻提取物的抗肿瘤效果。　　1材料　　1.1药材葫芦钻采自广西金秀瑶族自治县，经广西民族医药研究所戴斌主任药师鉴定为天南星科植物石

4、柑子。　　1.2动物昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄兼用，SPF级，购自广西医科大学实验动物中心（生产许可证号：SCXK桂20030003），动物分组分笼饲养，自由饮水，喂全价颗粒饲料，动物室温度（24±2）℃，相对湿度50%～60%。　　1.3主要药品与试剂RPMI1640培养基为Gibco公司的产品；MTT为Sigma公司的产品；小牛血清为杭州四季清公司的产品；DMSO（二甲基亚砜）为Sigma公司的产品；其余试剂均为分析纯。　　1.4细胞系人肝癌细胞BEL7404引自中国科学院上海细胞生物研究所细胞库；用RPMI1640培养液（含10%的小牛血清，100

5、ku·L-1青霉素，100mg·L-1链霉素）37℃，5%CO2，相对湿度100%培养，0.25%胰蛋白酶消化传代。　　1.5瘤株小鼠S180，H22腹水瘤株和小鼠S180，H22肉瘤株均由广西中医药研究所引进，本实验室冷冻保存，用昆明种小鼠接种传代。　　2方法　　2.1葫芦钻提取物的制备葫芦钻水提物：取药材加10倍量水水煎两次，1h/次，滤液合并浓缩，4℃冰箱保存备用；葫芦钻醇提物：取粗粉加5倍量95%乙醇回流提取3次，第1次2h，第2，3次各1h，合并滤液减压回收乙醇至无醇味，浓缩，4℃冰箱保存备用。　　2.2体外药效实验MTT法测定：BEL7404经胰蛋白酶处理

6、制成单细胞悬液，接种96孔板，每孔接种3000个细胞/100μl，含10%FBS的RPMI1640培养液，培养24h后，实验组分别加入最终浓度为1，5，10，20mg/ml葫芦钻水提物和醇提物的培养液，对照组则加入等体积溶剂的培养液。每组均设7个平行孔。置37℃，5%CO2培养箱培养5d后，加入MTT20μl，4h后弃上清，每孔加入DMSO100μl，1h内在BioRad550MicoplateReader上用波长546nm比色，测定OD值，按下式计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率［2］。　　肿瘤细胞生长抑制率(%)=（1实验组平均OD值/对照组平均OD值）×100%

7、　　2.3急性毒性实验在预试验基础上，取40只昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄各半，随机分为两组。以动物能耐受的最大浓度，最大容积的剂量，灌胃给药，葫芦钻水提物3.75g生药/ml，葫芦钻醇提物3.75g生药/ml，0.4ml/10g体重。给药后连续观察7d，逐日观察记录动物反应情况［3］。　　2.4体内药效实验［4］　　2.4.1对S180，H22腹水瘤小鼠生存天数的影响在无菌条件下，抽取小鼠腹腔内连续传代的S180，H22细胞，从右下腹部注入受体动物腹腔内，每鼠0.2ml。接种24h后随机分组，每组10只。接种次日葫芦钻水提物高、低