中药对耐甲氧西林葡萄球菌的体外敏感性研究

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1、中药对耐甲氧西林葡萄球菌的体外敏感性研究作者：栾耀芳，吴国英，孔祥山，王军【摘要】目的对多重耐药的耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）进行中药体外敏感试验，观察其诸多改变对中药治疗作用的影响，筛选有效中药。方法采用琼脂扩散法，以临床收集的MRS　30株为实验组，非耐甲氧西林的葡萄球菌30株为对照组进行体外敏感性研究，所选中药通过水提、醇提法制备药液，观察各种中药的抑菌环直径。结果所试中药体外抑菌效果从强到弱依次为：半枝莲水提液、半枝莲醇提液、射干醇提液、蒲公英醇提液、鱼腥草醇提液、蒲公英水提液、白头翁水提液、鱼腥草水提液、白头翁醇提液、射干水提液。实验组与对照组细菌的抑菌效果经统计学

2、分析，P>0.05，差异无显著性。结论对MRS引起的感染，在抗生素选择压力增大的情况下，中药可以成为治疗的较好选择。【关键词】中药；耐甲氧西林葡萄球菌；体外敏感性耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）通过合成分泌β-*基金项目：山东中医药管理局“十一五”计划项目（编号：2005-218）内酰胺酶及改变膜的渗透性、基因突变等方式，使自己呈现多重耐药性。通常MRS不论其体外药敏试验结果如何，所有的青霉素类、头孢菌素类、β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂均无临床疗效，并且绝大多数对氨基糖苷类、大环内酯类、四环素耐药，临床治疗起来非常困难。那么细菌的诸多改变是否影响中药的治疗作用呢？这一方

3、面未曾见有报道，为此我们选择了具有清热解毒、清热燥湿作用的中药通过水提与醇提的方法制备药液，对MRS进行了体外敏感性的对比研究，并对有效中药进行筛选，现报告如下。1实验材料1.1中药选择鱼腥草：三白草科植物蕺菜HorttuyniacordataThunb.的干燥地上部分，切段。射干：鸢尾科植物射干Belamcandachinensis（L.）DC.的干燥根茎，切片。蒲公英：菊科植物蒲公英TaraxacummongolicumHand.-Mazz.、碱地蒲公英T.sinicumKitag.或同属数种植物的干燥全草，切段。半枝莲：唇形科植物半枝莲Scutellariabarbat

4、aD.Don的干燥全草，切段。白头翁：毛茛科植物白头翁Pulsatillachinensis（Bge.）Regel的干燥根，切薄片。以上药物均购自我院中药房。1.2实验菌株来自本院门诊及病房临床标本中分离的葡萄球菌。选择经鉴定为耐甲氧西林的葡萄球菌（MRS）菌株30株为实验组，其中MRSA8株，MRS　22株;非MRS菌株30株为对照组，其中金黄色葡萄球菌17株，其他凝固酶阴性葡萄球菌13株。（仪器：英国先德SENSITITRE全自动微生物鉴定仪，鉴定符合率95%以上。MRS鉴定采用2004年NCCLS出版的药敏试验指南M100－S14手册推荐的30μg头孢西丁纸片法。）２实

5、验方法2.1中药制备2.1.1中药水提液取中药鱼腥草、射干、蒲公英、半枝莲、白头翁各500g，分别置提取容器中，加水适量，浸泡20min，继续加水6～8倍（根据药物容积不同，加水量不同），加热煎煮提取2次（2h,2h），过滤去渣，合并2次提取液，慢火浓缩至500ml左右（1g/ml），灌封，备用［1］。2.1.2中药醇提液取中药鱼腥草、射干、半枝莲、白头翁各500g，分别置提取容器中，加65%乙醇适量，浸泡20min，继续加提取溶剂6～8倍量，加热煎煮提取2次（2h,2h），过滤去渣，合并2次滤液，回收乙醇。慢火浓缩至500ml左右（1g/ml），灌封，备用［1］。2.2菌液

6、制备挑取培养18～24h的纯菌落，制成0.5麦氏单位，浓度相当于（1～1.5）×108CFU/ml的菌悬液，备用。2.3操作以无菌棉棒蘸取菌悬液，均匀涂抹于M-H琼脂平板，稍倾，在平板上打5～6个直径6mm左右的孔，深度约为4～5mm，加入浓度为1g/ml的中药液60μl，置平板于35℃～37℃孵箱培养，24h后量取抑菌环直径，以无菌生长的透明环的直径为最终结果。3结果经24h培养观察，所有中药对实验组及对照组细菌表现出不同的抑制效果，结果见表1、表2、表3，图1。表１不同中药对两组细菌的抑制效果比较表2中药的不同提纯方法对实验组细菌抑制效果比较表3中药的不同提纯方法对对照组

7、细菌抑制效果比较从表１中可以看出，所试中药对实验组及对照组细菌在抑菌效果上经统计学分析，均P>0.05，差异无显著性，因此，无论是显示多重耐药的葡萄球菌还是普通的葡萄球菌，中药的抑菌效果是基本相同的，说明这些多重耐药的特殊菌的诸多改变尚未影响中药的治疗作用，这样在用药环境上比较西药显示出了很大的优势，无需实验室进一步分类即可用药，可做到及时、高效。　　另外，根据抑菌环直径大小，所试中药体外抑菌效果从强到弱依次为：半枝莲水提液、半枝莲醇提液、射干醇提液、蒲公英醇提液、鱼腥草醇提液、蒲公英水提液、白头