糖尿病大鼠膀胱收缩功能改变与m3受体关系的实验研究

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1、糖尿病大鼠膀胱收缩功能改变与M3受体关系的实验研究【摘要】目的探讨糖尿病性膀胱发病机制中逼尿肌M3受体的改变情况。方法以链脲佐菌素诱导2型糖尿病大鼠成模。应用尿动力仪检测逼尿肌收缩功能；3受体含量。结果病程2周时糖尿病组大鼠膀胱逼尿肌收缩力增加伴M3受体表达增强；病程4周时糖尿病组大鼠膀胱逼尿肌收缩力低于正常对照组，但尚无统计学意义；病程12周时糖尿病组大鼠膀胱逼尿肌收缩力降低伴M3受体表达减少。结论膀胱收缩功能和M3受体蛋白含量及M3受体mRNA的含量三者呈同向变化关系。在糖尿病大鼠发病早期三者均升高，但是随着病程进展却都降低了。这可能是早期糖尿病性膀胱病变的发病机制之一

2、。　　【关键词】糖尿病性膀胱；逼尿肌；收缩功能；M3受体　　AlterationofdetrusorcontractionandM3subtypemuscarinicreceptorsinthetype2diabeticraturinarybladder　　【Abstract】ObjectiveToresearchintothealterationofdetrusorcontractionandM3subtypemuscarinicreceptorsinthediabeticcystopathy(DCP).MethodsThetype2diabeticratsg/kg)an

3、dhighcaloricdiet.Theidentical-inationofM3muscarinicreceptormRNAinthebladdertissue,themethodofRT-PCRployed.TheamountofM3receptorprotEinintheratbladderbodytissueeasuredbythemethodof3muscarinicreceptormRNAinthe4-ountofM3muscarinicreceptormRNAinthe12-onstratedthattheamountofM3muscarinicrecepto

4、rprotEIninthe2-uscarinicreceptormRNAandM3subtypemuscarinicreceptorsproteininthetype2diabeticraturinarybladderilar.Attheearlystageofdiabetesmellitus,Hoellitusisdeveloped,allofthreefactorsaredecreased.　　　　【Keyuscarinicreceptors糖尿病性膀胱（diabeticcystopathy，DCP）是糖尿病最常见的慢性并发症之一，虽然其临床表现和严重危害早已被人们所认

5、识，但其发病机制仍未阐明，故早期诊治比较困难。本实验研究2型糖尿病大鼠膀胱逼尿肌收缩功能改变和M3受体及M3受体mRNA的含量改变的关系，以期为阐明DCP的发病机制提供理论依据。　　1材料与方法　　1.1材料动物模型与分组：新生雌性gCl20.5mmol/L，NaHCO324.0mmol/L，葡萄糖5.6mmol/L)备用。　　1.2.2离体全膀胱收缩功能实验取一硬膜外导管,一端经尿道插入离体膀胱并妥善固定；另一端经三通管分别连接微量灌注泵和尿动力仪,作膀胱灌注和测压之用，全部实验过程在37℃、pH7.4、充氧(95%O2，5%CO2)的Tyrodes液中进行。首先将离体膀

6、胱温育平衡30min，接着以0.2ml/min的速度用生理盐水进行膀胱灌注。膀胱最大容量的测定：恒速灌注,当膀胱压力上升达到前10min压力的2倍以上时记录容量，记为膀胱最大容量。排空膀胱后静置15min。Tyrodes液中加入1mmol/LCarbachol再次进行恒速灌注，当达到最大膀胱容量时记录膀胱压力的变化情况。　　1.2.3RT-PCR法检测M3受体mRNA表达水平用Trizol法（上海生工产品）按照说明书提取总RNA。分光光度法测定RNA浓度后取2μg应用MMLV第一链cDNA合成试剂盒（上海生工产品）进行逆转录反应合成第一链cDNA。应用Primer3.0软件

7、进行引物设计，引物特征见表1。选用3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)为内参照。按照高保真即用PCR扩增试剂盒（上海生工产品）说明书进行PCR扩增反应，反应条件为：94℃，5min；94℃，40s；60℃，40s；72℃，40s（40个循环）；72℃，10min。PCR产物在1.6％的琼脂糖凝胶中100V恒压电泳约30min后，用复日FR-980生物凝胶电泳图像分析系统对电泳带成像并进行图像分析，测定其灰度值并计算M3受体与GAPDH的mRNA浓度比值用于定量比较。　　1.2.43受体蛋白的含量将膀胱组织置于液氮中研