血管内皮生长因子反义寡核苷酸对白血病细胞系hl60细胞作用的研究

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1、血管内皮生长因子反义寡核苷酸对白血病细胞系HL60细胞作用的研究作者：孙玲，王一浩，刘少君，王芳，马鸿雁，孙慧席雨人【摘要】本研究探讨VEGFASODN抑制白血病细胞内源性VEGFmRNA的表达作用及其与白血病细胞凋亡的关系。用阳离子聚合物介导硫代修饰VEGFODN转染体外培养白血病细胞系HL60细胞后，采用MTT法检测细胞增殖抑制率，RTPCR检测VEGFmRNA表达，以细胞形态学，凝胶电泳，流式细胞术观察细胞凋亡。结果显示：反义组与错义组、空白对照组相比，在细胞增殖抑制率和VEGFmRNA的表达水平方面均具有显著性差异(p<0.05)；错义组与空白对

2、照组相比无统计学差异（p>0.05）。反义组可见细胞皱缩，颗粒增多，核固缩并出现细胞碎片，而错义组、空白对照组细胞轮廓清楚，胞体透亮，生长旺盛；反义组有凋亡梯形带，错义组和空白对照组仅见1条DNA条带；反义组细胞凋亡率达19.46％，与错义组、空白对照组相比具有显著性差异（p<0.05）；错义组与空白对照组相比，无统计学差异（p>0.05）。VEGFASODN联合VP16的细胞凋亡率与等同条件单用VP16组相比有统计学差异（p<0.05）；且凋亡率具有时间和剂量依赖关系。结论：VEGFASODN能抑制白血病细胞内源性VEGFmRNA的表达，诱

3、导白血病细胞的凋亡，抑制增殖，且增强VP16对白血病细胞诱导凋亡作用，两者联合效应具有相加作用。【关键词】白血病EffectofVascularEndothelialGroanLeukemicCellLineHL60AbstractThisstudyedtoinvestigateexpressionofvascularendothelialgroRNA(VEGFmRNA)anditsrelationshipiccellapoptosisafterVEGFantisenseoligonucleotide(VEGFASODN)transferredintoHL60c

4、ells.ThephosphorothiateVEGFODNediatedmethod,theinhibitoryrateofcellproliferationRNAeasuredbyRTPCR,cellapoptosisorphologyobservation,DNAagarosegelelectrophoresisandfloeter(FCM).TheresultsshoRNAbetecondition（p<0.05）berofclustersofcellsinASODNgroupdecreased;themorphologyfeaturesofapop

5、toticcellsinvolvedcellshrinking,moregranulationincytoplasm,nuclearcontractingandmanyfragmentsofcells.InMSODNandcontrolgroups,hopandclear,andgroeanddosedependence.ItisconcludedthatVEGFASODNcandoRNAofHL60cells,inducestheapoptosis,inhibitstheproliferationofHL60cellsandenhancesVP16ind

6、ucedapoptosisinHL60cells,theVEGFASODNinbinationia；antisenseoligonucleotide；HL60cell;apoptosisJExpHematol2007;15(4):849-853血管内皮生长因子（vascularendothelialgroanCoulter公司产品)。硫代磷酸寡脱氧核苷酸（thiophospateoligonucleotide，ODN）和引物的合成VEGFODN按参考VEGFODN对HL60细胞VEGFmRNA表达的影响反义组VEGFmRNA相对表达率与错义组、空白对照相比均

7、有显著性差异（p<0.05），错义组与空白对照相比无显著性差异（p>0.05）(表2、图2)。细胞形态学的改变反义组细胞集落减少，胞体缩小，胞膜皱缩，胞浆中颗粒增多，染色质凝集，核固缩并出现细胞碎片；而错义组、空白对照组细胞均呈半贴壁生长，细胞轮廓清晰，胞体透亮，生长旺盛（图3）。细胞DNA的电泳变化琼脂糖凝胶电泳显示：错义组和空白对照组均仅在靠近加样孔处见1条完整的DNA带，而反义组见到多条明显向远端延伸的典型凋亡梯形带（图4）。Figure3.MorphologyofHL60cellstransferredbyVEGFCDN(incubated