维生素c抑制甘露醇诱导的血管内皮细胞凋亡的实验研究

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1、维生素C抑制甘露醇诱导的血管内皮细胞凋亡的实验研究作者：潘开宇，尚世强，戴晓娜，叶志弘【关键词】维生素C;凋亡;血管内皮细胞;甘露醇　　［摘要］目的:探讨维生素C对甘露醇引起血管损伤及其诱导的血管内皮细胞凋亡基因表达的影响。方法:（1）动物实验:将健康大白兔随机分4组，A组在兔耳缘静脉注射甘露醇;B、C、D组分别以生理盐水、维生素C、维生素E预处理后再静脉推注甘露醇，电镜、光镜下观察局部血管的损伤。（2）利用BiostarH-40s型芯片，检测甘露醇分别在应用三种保护剂前后对凋亡基因表达的影响。结果:（1）动

2、物实验:血管损伤程度上，A组为重度;B组为中～重度;D组为轻度;C组未见明显病理改变。（2）基因芯片检测:330条凋亡基因中，生理盐水组芯片无改变;维生素C组中45条促凋亡基因表达下调，34条抗凋亡基因表达上调;维生素E组3条促凋亡基因表达下调。结论:维生素C通过抑制血管内皮细胞凋亡而起到抑制甘露醇血管损伤的作用。　　［关键词］维生素C;凋亡;血管内皮细胞;甘露醇　　AnexperimentoninhibitiveaffectionofvitaminContheapoptosisofvascularendot

3、helialcellinducedbymannitol　　［Abstract］Objective:Toresearchthegeneexpressionsofinjuryonbloodvesselandvascularendothelialcellapoptosisinducedbymannitolinus-ingvitaminC.Methods:（1）Animalexperiment:healthyrabbitsizedinto4groups.GroupAannitolintothevEinoftherab

4、bitear.GroupB，groupC，andgroupD，annitol.Electroniclensandopticalmicroscopeannitolbeforeandafterusingprotectiveagents.Results:（1）Asforthedegreeofinjuryofthebloodvessel，groupAoderatetoserious，andgroupDisslight.Nopathologicalchangesalsaline，noneinC，45apoptosisg

5、enesinE，only3apoptosisgenesinCcanprotectvascularendothelialcell.　　［KeyinC;Apoptosis;Vascularendothelialcell;Mannitol　　甘露醇是目前儿科临床使用最多的渗透性利尿剂，该药具肾毒性，也可引起静脉炎。　　封三图5系散点图，代表Cy3（对照组）和Cy5（实验组）荧光信号比值的离散程度。每个点的Y轴为Cy5的杂交信号相对强度，X轴为Cy3的杂交信号相对强度。45度角直线上的点Cy5.Cy3比值为1，表示无

6、差异表达，远离45度角直线上的点为差异表达基因，越靠近X轴或Y轴表明该点基因差异表达越显著。　　利用基因芯片技术，筛选出Cy5.Cy3比值大于2.0或小于0.5的差异基因。ratio值<0.5代表基因表达下调，在0.5～2.0之间代表基因表达无显著差异，>2.0代表基因表达上调。检测结果表明，在330条凋亡相关基因中，经生理盐水预处理的芯片上未发现此类基因表达发生改变;经维生素C预处理后有79条表达发生改变，其中45条促凋亡基因表达下调，34条抗凋亡基因表达上调;经维生素E预处理的芯片上发现3条促

7、凋亡相关基因表达下调。330个点中有14个点最为重要，已被证实由甘露醇诱导，分别为:视紫红质抑制蛋白、表皮生长因子受体、蛋白酪氨酸磷酸酶、膜内陷素、ATP-结合序列、热激蛋白、粘连蛋白、微管蛋白、肿瘤坏死因子、线粒体核糖酶、T细胞激活核因子、整合素、N-钙粘蛋白、钙通道。在维生素C预处理芯片中此14个基因均明显下调，在维生素E预处理芯片中仅视紫红质抑制蛋白下调。表明经维生素C预处理可有效干预甘露醇诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡，经维生素E预处理可轻微抑制细胞凋亡。　　3讨论　　基因芯片是20世纪90年代发展起来的

8、一项前沿生物技术，也叫DNA微阵列，是通过复杂的物理或化学方法，将大量的已知序列的DNA片断有规则地固定在约1cm2的支持物上（玻璃、硅等），从而检测特定的基因序列的一项技术。本研究所使用的BiostarH-40s表达谱芯片包含了4096个人靶基因cDNA克隆，主要基因包括细胞凋亡相关的蛋白、细胞周期蛋白类、DNA合成和修复、DNA结合、转录和转录因子、细胞信号和传递蛋白等。为减少实验引起的误差，芯