色谱指纹图谱分析技术用于鉴别中药玄参产地的研究

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1、色谱指纹图谱分析技术用于鉴别中药玄参产地的研究作者：马登峰周浓白志川房立晶孙婵娟【摘要】目的采用高效液相色谱（HPLC）色谱指纹图谱分析技术鉴别中药玄参产地。方法采用HPLC法测定了重庆市武隆县玄参等14个不同产地玄参样品。色谱条件C18柱，甲醇-1%冰醋酸为流动相进行梯度洗脱，检测波长290nm，体积流量1.0ml/min，柱温30℃。结果对重庆市武隆县10批次玄参样品的多个活性成分进行综合评价，筛选出重庆市道地药材玄参为建模对象，合成出玄参的标准HPLC色谱指纹图谱模型；并用此模型和特征成分的相对峰面积比值准确地区分浙

2、江省磐安县等不同产地玄参。结论研究将有助于玄参药材的标准化种植及质量控制。【关键词】玄参肉桂酸高效液相色谱法指纹图谱质量控制Abstract：ObjectiveToidentifytheHabitalofRadixScrophulariaeatographicFingerprinting.MethodsActiveconstituentstenbatchesofsampleofRadixScrophulariae(ScrophularianingpoensisHemsl.),ChongqingC18columnethano

3、l-1%glacialaceticacidasmobilephase,thedetection,theflol·min-1,andcolumntemperaturetenbatchesofsampleofRadixScrophulariae(ScrophularianingpoensisHemsl.),ChongqingC18柱（250mm×4.6mm,5μm）（美国迪马公司）；流动相：甲醇-1%冰醋酸，流动相A为甲醇，流动相B为1%冰醋酸水溶液。检测波长290nm，柱温30℃，流速1.0ml/min，进样量20μl。理论

4、塔板数按肉桂酸峰计算不低于2000，与其它峰的分离度均大于1.0，所有组分均在50min内被检测完。见表2。表2指纹图谱流动相线性梯度表1.5对照品溶液的制备精密称取肉桂酸对照品适量，加甲醇制成每毫升含50.0μg的溶液，即得。1.6供试品溶液的制备取玄参药材粉末（过50目筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇30ml，密塞，称定重量，浸泡1h后，超声处理（功率250in，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。1.7方法学考察1.7.1稳定性实验取同一批次供试品（样品号：8），在室

5、温下放置，分别于0，2，4，6，8，10，12，24，36，48h检测指纹图谱。用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算，结果表明，在同一台仪器测得的色谱指纹图谱的相似度分别为0.9997，0.9998，0.9995，0.9997，0.9996，满足相似度不小于0.950的要求，各主要色谱峰相对保留时间和其相对峰面积比值无明显变化，RSD分别为0.00%～0.28%和0.00%～2.95%，RSD＜3.00%，各色谱峰的相对保留时间在平均保留时间±1min内，符合指纹图谱要求。说明供试品溶液的成分在48h内是稳定的。1.7.2

6、精密度实验取同一批次供试品（样品号：8），连续进样5次，记录指纹图谱。用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算，结果表明，在同一台仪器测得的色谱指纹图谱的相似度分别为0.9992，0.9998，0.9996，0.9997，0.9998，满足相似度不小于0.950的要求，各主要色谱峰相对保留时间和其相对峰面积比值无明显变化，RSD分别为0.00%～0.34%和0.00%～2.85%，RSD＜3.00%，各色谱峰的相对保留时间在平均保留时间±1min内，符合指纹图谱要求。说明仪器的精密度良好。1.7.3重复性实验取同一批次样品（样

7、品号：3），按供试品溶液的制备方法分别制备5份供试品，记录指纹图谱。用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算，结果表明，在同一台仪器测得的色谱指纹图谱的相似度分别为0.9999，0.9992，0.9996，0.9998，0.9993，满足相似度不小于0.950的要求，各主要色谱峰相对保留时间和其相对峰面积比值无明显变化，RSD分别为0.00%～0.34%和0.00%～2.84%，RSD＜3.00%，各色谱峰的相对保留时间在平均保留时间±1min内，符合指纹图谱要求。说明该实验方法的重复性较好。2结果2.1供试品测定同一上述实验

8、条件下，连续测定14批次供试品HPLC色谱图。2.2指纹图谱根据重庆市武隆县10批次供试品测定结果所给出的峰数、峰值（积分值）和峰位（相对保留时间）等相关参数，进行分析、比较，制定优化的指纹图谱见图1。2.3指纹图谱分析与评价用“1.4”项下的色谱条件测定了重庆市武隆县10批次玄参药材指纹图谱，见图2。