色谱指纹图谱分析技术用于鉴别中药玄参产地的研究

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1、色谱指纹图谱分析技术用于鉴别中药玄参产地的研究作者:马登峰周浓白志川房立晶孙婵娟【摘要】目的采用高效液相色谱(HPLC)色谱指纹图谱分析技术鉴别中药玄参产地。方法采用HPLC法测定了重庆市武隆县玄参等14个不同产地玄参样品。色谱条件C18柱,甲醇-1%冰醋酸为流动相进行梯度洗脱,检测波长290nm,体积流量1.0ml/min,柱温30℃。结果对重庆市武隆县10批次玄参样品的多个活性成分进行综合评价,筛选出重庆市道地药材玄参为建模对象,合成出玄参的标准HPLC色谱指纹图谱模型;并用此模型和特征成分的相对峰面积比值准确地区分浙

2、江省磐安县等不同产地玄参。结论研究将有助于玄参药材的标准化种植及质量控制。【关键词】玄参肉桂酸高效液相色谱法指纹图谱质量控制Abstract:ObjectiveToidentifytheHabitalofRadixScrophulariaeatographicFingerprinting.MethodsActiveconstituentstenbatchesofsampleofRadixScrophulariae(ScrophularianingpoensisHemsl.),ChongqingC18columnethano

3、l-1%glacialaceticacidasmobilephase,thedetection,theflol·min-1,andcolumntemperaturetenbatchesofsampleofRadixScrophulariae(ScrophularianingpoensisHemsl.),ChongqingC18柱(250mm×4.6mm,5μm)(美国迪马公司);流动相:甲醇-1%冰醋酸,流动相A为甲醇,流动相B为1%冰醋酸水溶液。检测波长290nm,柱温30℃,流速1.0ml/min,进样量20μl。理论

4、塔板数按肉桂酸峰计算不低于2000,与其它峰的分离度均大于1.0,所有组分均在50min内被检测完。见表2。表2指纹图谱流动相线性梯度表1.5对照品溶液的制备精密称取肉桂酸对照品适量,加甲醇制成每毫升含50.0μg的溶液,即得。1.6供试品溶液的制备取玄参药材粉末(过50目筛)约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇30ml,密塞,称定重量,浸泡1h后,超声处理(功率250in,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。1.7方法学考察1.7.1稳定性实验取同一批次供试品(样品号:8),在室

5、温下放置,分别于0,2,4,6,8,10,12,24,36,48h检测指纹图谱。用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算,结果表明,在同一台仪器测得的色谱指纹图谱的相似度分别为0.9997,0.9998,0.9995,0.9997,0.9996,满足相似度不小于0.950的要求,各主要色谱峰相对保留时间和其相对峰面积比值无明显变化,RSD分别为0.00%~0.28%和0.00%~2.95%,RSD<3.00%,各色谱峰的相对保留时间在平均保留时间±1min内,符合指纹图谱要求。说明供试品溶液的成分在48h内是稳定的。1.7.2

6、精密度实验取同一批次供试品(样品号:8),连续进样5次,记录指纹图谱。用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算,结果表明,在同一台仪器测得的色谱指纹图谱的相似度分别为0.9992,0.9998,0.9996,0.9997,0.9998,满足相似度不小于0.950的要求,各主要色谱峰相对保留时间和其相对峰面积比值无明显变化,RSD分别为0.00%~0.34%和0.00%~2.85%,RSD<3.00%,各色谱峰的相对保留时间在平均保留时间±1min内,符合指纹图谱要求。说明仪器的精密度良好。1.7.3重复性实验取同一批次样品(样

7、品号:3),按供试品溶液的制备方法分别制备5份供试品,记录指纹图谱。用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算,结果表明,在同一台仪器测得的色谱指纹图谱的相似度分别为0.9999,0.9992,0.9996,0.9998,0.9993,满足相似度不小于0.950的要求,各主要色谱峰相对保留时间和其相对峰面积比值无明显变化,RSD分别为0.00%~0.34%和0.00%~2.84%,RSD<3.00%,各色谱峰的相对保留时间在平均保留时间±1min内,符合指纹图谱要求。说明该实验方法的重复性较好。2结果2.1供试品测定同一上述实验

8、条件下,连续测定14批次供试品HPLC色谱图。2.2指纹图谱根据重庆市武隆县10批次供试品测定结果所给出的峰数、峰值(积分值)和峰位(相对保留时间)等相关参数,进行分析、比较,制定优化的指纹图谱见图1。2.3指纹图谱分析与评价用“1.4”项下的色谱条件测定了重庆市武隆县10批次玄参药材指纹图谱,见图2。

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