色谱指纹图谱分析技术用于鉴别中药玄参产地的研究

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1、色谱指纹图谱分析技术用于鉴别中药玄参产地的研究马登峰周浓白志川房立晶孙婵娟【摘要】目的采用高效液相色谱（HPLC）色谱指纹图谱分析技术鉴别中药玄参产地。方法采用HPLC法测定了重庆市武隆县玄参等14个不同产地玄参样品。色谱条件C18柱，甲醇-1%冰醋酸为流动相进行梯度洗脱，检测波长290nm，体积流量1.0ml/min，柱温30℃。结果对重庆市武隆县10批次玄参样品的多个活性成分进行综合评价，筛选出重庆市道地药材玄参为建模对象，合成出玄参的标准HPLC色谱指纹图谱模型；并用此模型和特征成分的相对峰面积比值准确地区分浙江省磐安县等不同产地玄参。结论研究将有助于玄参药材的标准化种植

2、及质量控制。【关键词】玄参肉桂酸高效液相色谱法指纹图谱质量控制Abstract：ObjectiveToidentifytheHabitalofRadixScrophulariaeatographicFingerprinting.MethodsActiveconstituentstenbatchesofsampleofRadixScrophulariae(ScrophularianingpoensisHemsl.),ChongqingC18columnethanol-1%glacialaceticacidasmobilephase,thedetection,theflol·min

3、-1,andcolumntemperaturetenbatchesofsampleofRadixScrophulariae(ScrophularianingpoensisHemsl.),ChongqingC18柱（250mm×4.6mm,5μm）（美国迪马公司）；流动相：甲醇-1%冰醋酸，流动相A为甲醇，流动相B为1%冰醋酸水溶液。检测波长290nm，柱温30℃，流速1.0ml/min，进样量20μl。理论塔板数按肉桂酸峰计算不低于2000，与其它峰的分离度均大于1.0，所有组分均在50min内被检测完。见表2。表2指纹图谱流动相线性梯度表1.5对照品溶液的制备精密称取肉桂酸对

4、照品适量，加甲醇制成每毫升含50.0μg的溶液，即得。1.6供试品溶液的制备取玄参药材粉末（过50目筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇30ml，密塞，称定重量，浸泡1h后，超声处理（功率250in，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。1.7方法学考察1.7.1稳定性实验取同一批次供试品（样品号：8），在室温下放置，分别于0，2，4，6，8，10，12，24，36，48h检测指纹图谱。用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算，结果表明，在同一台仪器测得的色谱指纹图谱的相似度分别为0.9997，0.9998，0.9995，0.9997，0

5、.9996，满足相似度不小于0.950的要求，各主要色谱峰相对保留时间和其相对峰面积比值无明显变化，RSD分别为0.00%～0.28%和0.00%～2.95%，RSD＜3.00%，各色谱峰的相对保留时间在平均保留时间±1min内，符合指纹图谱要求。说明供试品溶液的成分在48h内是稳定的。1.7.2精密度实验取同一批次供试品（样品号：8），连续进样5次，记录指纹图谱。用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算，结果表明，在同一台仪器测得的色谱指纹图谱的相似度分别为0.9992，0.9998，0.9996，0.9997，0.9998，满足相似度不小于0.950的要求，各主要色谱峰相对保留

6、时间和其相对峰面积比值无明显变化，RSD分别为0.00%～0.34%和0.00%～2.85%，RSD＜3.00%，各色谱峰的相对保留时间在平均保留时间±1min内，符合指纹图谱要求。说明仪器的精密度良好。1.7.3重复性实验取同一批次样品（样品号：3），按供试品溶液的制备方法分别制备5份供试品，记录指纹图谱。用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算，结果表明，在同一台仪器测得的色谱指纹图谱的相似度分别为0.9999，0.9992，0.9996，0.9998，0.9993，满足相似度不小于0.950的要求，各主要色谱峰相对保留时间和其相对峰面积比值无明显变化，RSD分别为0.00%～

7、0.34%和0.00%～2.84%，RSD＜3.00%，各色谱峰的相对保留时间在平均保留时间±1min内，符合指纹图谱要求。说明该实验方法的重复性较好。2结果2.1供试品测定同一上述实验条件下，连续测定14批次供试品HPLC色谱图。2.2指纹图谱根据重庆市武隆县10批次供试品测定结果所给出的峰数、峰值（积分值）和峰位（相对保留时间）等相关参数，进行分析、比较，制定优化的指纹图谱见图1。2.3指纹图谱分析与评价用“1.4”项下的色谱条件测定了重庆市武隆县10批次玄参药材指纹图谱，见图2。通过对