桑黄提取精制工艺的研究

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1、桑黄提取精制工艺的研究作者:戈延茹,张春燕,姜树红【摘要】  目的优选桑黄多糖的提取、精制工艺。方法采用正交实验设计优选桑黄多糖提取工艺。通过吸附法与醇沉法的比较,选出最佳精制工艺。结果桑黄多糖最佳提取工艺为:粉碎粒度60目,浸泡12h,用14倍的水,提取3h,用壳聚糖吸附法精制多糖。结论浸泡时间对实验影响较大,采用壳聚糖吸附法精制,多糖损失少,此提取精制工艺方法可行。【关键词】桑黄;多糖;正交设计;提取;精制  Abstract:ObjectiveTooptimizetheextractionandpurificationmethodofthepolysacch

2、arideofPhellinusigniarius.MethodsThebsetextractmethodofthepolysaccharideinedbyorthogonaldesign.Throughtheparisonoftheethanolextractionandadsorbingpurification,thebestpurificationmethodethodofthepolysaccharideinthePhellinusigniariusesh,theimmersiontimeaterial14:1,andextracted3times.Chi

3、tosanabsorbingpurificationmersiontimegreatlyinfluencedtheextractionofPhellinusigniarius.Chitosanabsorbingpurificationg,置250ml容量瓶中,加水至刻度,摇匀,配成浓度为100.4μg/ml标准葡萄糖溶液备用。  5%苯酚试剂的配制:称取蒸馏后苯酚7.5g,加水150ml溶解,置棕色瓶内放冰箱备用。  标准曲线的绘制:精确量取葡萄糖标准溶液0.1,0.2,0.3,0.5,0.7,0.9ml置干燥试管中分别再加水使其成1.0ml,再分别加入5%苯酚溶

4、液2.0ml,摇匀。然后加浓H2SO47.0ml,充分摇匀,室温放置25min,在490nm处测定其最大吸光度,同时做一空白。以吸光度对葡萄糖浓度线性回归,得回归方程为Y=0.0634X+0.0104(r=0.9922,n=6)。实验表明,葡萄糖在0.91~9.16μg/ml范围内呈现良好的线性关系。见图1。  图1标准曲线(略)  2.1.2样品测定样品经处理后(供试品溶液的制备),移至250ml容量瓶中,定容,摇匀,精确吸取2ml到25ml容量瓶,定容,摇匀成为样品液。测定时,精确吸取样品液1ml,按测定标准曲线同样方法测其吸光度值,按下式计算多糖含量:   

5、 多糖含量(%)=CD/l);D为样品溶液的稀释倍数,W为生药的重量(μg)。  2.2桑黄多糖提取工艺的选择  2.2.1制定考察因素与水平[5]据  2.3桑黄多糖精制工艺的选择[6,7]  2.3.1药材的提取取桑黄药材100g,按最佳提取方案提取,提取液过滤,合并滤液,浓缩至400ml,定容到500ml容量瓶中备用。  2.3.2水提液的制备取3份药材提取液,每份1ml,置250ml容量瓶中,定容即得水提液供试品。用“2.1.2”项条件测定多糖的含量,重复做3次。结果见表4所示。  表4最优方案所得多糖含量(略)  2.3.3醇沉法精制取3份药材提取液,每

6、份10ml,分别加入95%乙醇,使乙醇浓度达到70%,冰箱内静置24h,然后过滤,滤液再加入95%乙醇,使乙醇浓度达到90%,冰箱内静置24h,过滤,滤渣水溶解,定容至50ml容量瓶中,精密吸取2ml置50ml容量瓶中,定容至刻度,即得醇沉法供试液。用“2.1.2”项条件测定多糖的含量,重复做3次。  2.3.4壳聚糖吸附法精制壳聚糖吸附剂的配制:将壳聚糖用1%醋酸配成1%溶液。壳聚糖吸附剂的用量确定:取20份桑黄水提液,每份5ml,分别加入壳聚糖吸附剂5,10,15,20,25,30,……100d,结果加入壳聚糖吸附剂25d时澄明度最好。壳聚糖吸附法精制工艺:取

7、3份桑黄,每份25ml,分别加入壳聚糖吸附剂125d,置60℃的水浴上加热并以搅拌速度为100r/min的搅拌15min,放置至澄清为止,过滤,滤液置100ml容量瓶中定容至刻度,精密称取1ml置25ml容量瓶中,定容至刻度,用“2.1.2”条件测定多糖的含量,重复做3次。  2.3.5多糖含量比较分别按以上两种方法测定桑黄多糖的含量,按下式进行计算。结果见表5。  多糖含量(%)=(C×D/.A.Curtis)Teng[J].BioresourceTechnology,2003,89(1):81.

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