两种cpg odn佐剂对小鼠白血病局灶瘤的抗瘤作用研究

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1、两种CpGODN佐剂对小鼠白血病局灶瘤的抗瘤作用研究作者：何爱丽,陈虹,张王刚,曹星梅,赵万红【摘要】为了比较免疫佐剂CpGODN1826和CpGODN2006在白血病局灶肿瘤动物模型中的抗瘤作用和毒副作用，筛选合适的免疫佐剂，建立了急性淋巴细胞白血病局灶肿瘤动物模型，在不同时间用灭活的L1210细胞和不同免疫佐剂给DBA/2小鼠皮下注射，观察小鼠一般状况、成瘤率、瘤块生长情况，了解瘤块病理情况。结果表明：灭活细胞加CpGODN1826瘤苗可以降低小鼠成瘤率，成瘤小鼠的瘤块生长缓慢，瘤块内部肿瘤细胞坏死明显，但生存期无明显

2、延长；CpGODN2006组小鼠成瘤率不但降低，瘤块缩小，而且生存期也明显延长，已生长的肿瘤消退。结论：应用CpGODN2006瘤苗可以增强白血病局灶肿瘤小鼠的抗瘤作用，使生存期明显地延长，无明显的毒副作用。【关键词】白血病AntitumorEffectofTicTumorinMouseModelsAbstractToinvestigatetheantitumorandsideeffectofCpGODN1826andCpGODN2006asanadjuvantsonleukemictumorinmousemodel

3、s,anacutelymphocyticleukemictumorinmousemodelodelmouseatdifferenttimes.Theactivitiesofmice,thetumorformationrateandthegroictumororinedbypathologicsection.Theresultsshoictumorformationrate,sloictumormassinmiceandobviouslycausenecrosisoftumorcells,butitcouldnotprolo

4、ngthelifespansofthetumorburdenmice;orformationrate,sloormassinmiceandresultinobviousnecrosisoftumorcells,butalsocouldeliminatetheexistingtumormassinmice,andprolongthelifespansofthetumorburdenmice.ItisconcludedthatusingCpGODN2006asanadjuvantenhancestheantitumore

5、ffectagainsttheleukemictumor,prolongthelifespanoftumorburdenmiceia;tumorvaccine;cytidinephosphatteguanonineoligodeoxynucleotides白血病的免疫治疗，长期以来一直受到人们的重视。随着生物科学技术的发展，肿瘤疫苗已经从早期的单纯灭活肿瘤细胞疫苗到今天的利用生物工程建立基因修饰肿瘤疫苗等多种形式。我科曾经应用白血病瘤苗，主动免疫治疗白血病患者，取得了良好疗效［1］，但大多患者注射局部红肿硬结，疼痛，

6、很难坚持治疗，这提示我们寻找作用效果更好、副作用更小的免疫佐剂。我们通过白血病局灶肿瘤动物模型观察免疫佐剂CpGODN1826和CpGODN2006的抗白血病局灶肿瘤作用和毒副反应，为临床治疗提供实验依据。材料和方法动物及肿瘤细胞DBA/2小鼠，雌雄各半共38只，体重22-28克，购自第四军医大学动物中心，为二级清洁动物。小鼠白血病细胞株L1210由西安交通大学生命科学院惠赠。　　两种CpGODN佐剂对小鼠白血病局灶瘤的抗瘤作用研究主要试剂GpGODN1826TCCATGACGTCCCTGACGTT全硫逐磷酸骨架，CpGO

7、DN2006TCGTCGTTTCGTTTTGTCGTT全硫逐磷酸骨架，为Coley公司产品；丝裂霉素C购于上海金康制药公司。小鼠白血病模型的制备取对数生长期的L1210细胞，用PBS洗3遍，调整浓度至1×105/ml，于每只小鼠右肋下皮肤分别注射0.1ml（即5×104个肿瘤细胞），5-7天后可触及皮下结节。小鼠肿瘤疫苗的制备收获处于对数期生长的L1210细胞，800rpm离心8分钟，加入丝裂霉素C（终浓度为100μg/ml），于37℃水浴中放置30分钟，用PSB液洗涤3遍后，调整细胞浓度至2×107/ml，作瘤苗备用；将

8、CpGODN1826和CpGODN2006用PBS液分别溶解后，调整浓度至500μg/ml，备用。实验分组将小鼠随机分为4组（每组小鼠雌雄各半），每组9-10只小鼠：①CpGODN1826组：CpGODN1826（0.1ml，50μg）+灭活的肿瘤细胞（0.1ml，2×106个）；②CpGODN2006