宁夏苦豆子根的高效液相色谱指纹图谱研究

《宁夏苦豆子根的高效液相色谱指纹图谱研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、宁夏苦豆子根的高效液相色谱指纹图谱研究【摘要】　　目的建立宁夏苦豆子根的指纹图谱分析方法。方法采用高效液相色谱法以ZORBAXSB-C18（250mm×6mm，5μm）为色谱柱；流动相为乙腈∶0.1%H3PO4+0.1%（C2H5）3N，梯度洗脱；流速1.0ml·min-1；检测波长215nm；柱温30℃。结果用梯度洗脱得到的色谱图各色谱峰分离效果较好，达到指纹图谱要求。结论为更好地控制宁夏苦豆子的内在质量提供了可靠的分析方法。【关键词】苦豆子指纹图谱高效液相色谱　　Abstract:Objective

2、ToestablishafingerprintanalysismethodofrootsofSophoraalopecuroidesL.MethodsThefingerprintedbyHPLC.ZORBAXSB-C18columnobilephasel·min-1；thedetection；thecolumntemperatureethodisprovidedforthequalityconorolofSophoraalopecuroidesL.　　Keyl，在30℃，40kHz功率下超声提取30mi

3、n，抽滤，将滤液蒸干，加入甲醇溶解并定容至10ml，离心，取上清液，0.45μm滤膜过滤，即得。　　1.3对照品溶液的制备精密称取苦参碱和氧化苦参碱各0.0100g，以甲醇溶解并定容至10ml容量瓶，摇匀，即得。　　1.4色谱条件色谱柱为ZORBAXSB-C18柱（250mm×6mm，5μm）；流动相为乙腈（A）∶水〔1000mlH2O+1.0mlH3PO4+1.0ml（C2H5）3N〕（B），梯度洗脱，洗脱程序见表2。柱温30℃，流速为1.0ml·min-1，检测波长215nm，进样量10μl，以峰面

4、积定量。表2梯度洗脱时间（略）　　2结果　　2.1检测波长的确定取上述对照品溶液，通过紫外可见分光光度计全波段扫描，结果显示对照品溶液在215nm处有最大吸收，确定检测波长为215nm。　　2.2对照品色谱图分别取苦参碱及氧化苦参碱混合对照品溶液，在上述色谱条件下进样，记录色谱图。见图1。　　2.3精密度、稳定性及重复性实验取同一份样品溶液（3号），按拟定的色谱条件，连续进样5次，记录其色谱图，导出各色谱数据，用国家药典委员会提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算整体相似度，结果得到精密度的相似度在0

5、.996～0.999之间，符合指纹图谱的要求。　　取同一份样品溶液（2号），分别在0，4，12，18，24h进样，按拟定的色谱条件进行测定，记录其色谱图，导出各色谱图数据，计算整体相似度，结果得到稳定性的相似度在0.995～0.998之间，符合指纹图谱的要求。　　取样品（3号）5份，精密称定，超声法制备各供试品溶液，按拟定色谱条件进行测定，记录其色谱图，导出各色谱图数据，计算整体相似度，结果得到重复性的相似度在0.901～0.967之间，符合指纹图谱的要求。　　2.4指纹图谱及各项技术参数　　2.4.1

6、指纹图谱　　按上述方法分别检测10批不同产地苦豆子样品的根，按拟定色谱条件进行测定，导出各色谱图数据，匹配后，见图2。　　由图2结果可见，10批样品的色谱峰在0～30min之间并无明显差异，具有较高的相似性，而在30～60min之间，其色谱图有一定差异，表明了不同产地苦豆子根所含化学成分基本相似，但个别成分之间还是有一定差异性。　　2.4.2共有指纹峰的确立及相对保留时间和峰面积计算通过国家药典委员会提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统分析苦豆子根的10批样品HPLC色谱图，确定了14个共有峰作为可以构

7、成指纹图谱的稳定的特征峰，见图3。　　共有峰的相对保留时间［4］：以图谱中氧化苦参碱为参照物（S），将各色谱峰保留时间与同一图谱中参照物的保留时间比较，其比值为各色谱峰的相对保留时间。分别计算10批苦豆子样品中各色谱峰的相对保留时间。结果见表3。表310批苦豆子根共有峰的相对保留时间（略）　　共有峰的相对峰面积［5］：以图谱中氧化苦参碱为参照物（S），将各色谱峰峰面积与同一图谱中参照物的峰面积比较，其比值为各色谱峰的相对峰面积。分别计算10批苦豆子样品指纹图谱中各色谱峰的相对峰面积。结果见表4。表410

8、批苦豆子根共有峰的相对峰面积（略）　　2.4.3相似度计算　　采用国家药典委员会提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版软件计算，得到10批样品的对照图谱，每1份样品图谱与对照图谱相比较，得到每1份样品的相似度。10批药材中，6号样品根的指纹图谱相似度最低，仅为0.682，其余9批相似度在0.703～0.908之间。　　3讨论　　苦豆子是宁夏的主要中药材之一，在宁夏具有丰富的资源。从苦豆子中提取苦参碱、氧化苦参碱及总生物碱，并将其加