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时间:2018-05-03
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1、气阴双补法对干燥综合征小鼠的实验研究【摘要】目的研究气阴双补法对干燥综合征小鼠的作用。方法将60只Bacb/C小鼠,按体质量随机分为6组,每组10只,即正常组,模型组,羟氯喹组,增液布津汤小剂量组、中剂量组和大剂量组。对照组用羟氯喹片剂,观察体质量、摄食量、饮水量、唾液流量、脾指数及颌下腺病理形态学变化。结果增液布津汤能有效缓解口干、口腔烧灼感、眼干、眼异物感、鼻干等临床症状。实验室检查方面能增加唾液流量及泪流量,病理显示能抑制淋巴细胞浸润。结论运用气阴双补不仅能缓解干燥综合征小鼠临床症状,而且能纠正免疫紊乱,疗效优于对照组。【关
2、键词】气阴双补;干燥综合征;小鼠 Abstract:ObjectiveToresearchthefunctionofthemethodofnourishingboth"qi"andbloodonthemicehavingSS.MethodsPutthe60Bacb/Cmiceinto6groupsaccordingtothEir,thereiceineachgroup.Thegroupsincludedthenormalgroup,themodelgroup,thehydroxychloroquinegroup,theloidd
3、leandhighdosegroupusingZengyeBujinDecoction.A,USA,Lot:075K8915;吸附无细胞百日咳、白喉、破伤风联合疫苗,成都生物制品研究所,批号:200503171。PBS磷酸盐缓冲液,0.01M,pH7.2~7.4,中杉金桥,批号:ZLI9061;牛血清白蛋白,南京生兴生物技术有限公司,Amresco分装,Lot:1105S02;MouseIFNγELISAKIT,晶美生物工程有限公司,Lot:FMK0003;MouseIL4ELISAKIT,晶美生物工程有限公司,Lot:F
4、MK0005。 1.4仪器FA2104上皿电子天平,上海精科;XICROPALTEREADER。 2方法 2.1分组及给药60只Bacb/C小鼠,按体重随机分为6组,每组10只。临用前分别将上述药物用生理盐水配成以下浓度:正常组:生理盐水10ml/kg;模型组:生理盐水10ml/kg;羟氯喹组:0.1g/kg;增液布津汤小剂量组:0.05g/kg;增液布津汤中剂量组:0.075g/kg;增液布津汤大剂量组:0.10g/kg。且小鼠灌胃体积为10ml/kg。各组均在第0天即开始给药。 2.2抗原的制备取8只Bacb/C小鼠,
5、脱颈椎处死,75%酒精浸泡10min,在无菌操作台上解剖颈部,取出两侧颌下腺,分离包膜及结缔组织,用氯化钠注射液洗净,置无菌滤纸上吸干,称重,用显微剪剪碎,每0.1g置入10ml无菌试管中,加氯化钠注射液2ml,在冰浴中用匀浆器以5000r/min匀浆20s,4℃低温离心机中3000r/min离心20min,弃去上层脂质,吸出上清液,置10ml无菌试管中,以上操作均在低温下进行。 2.3Lol;溶液B:2gNa2CO3、0.4gNaOH加重蒸水至100ml;溶液C:1ml溶液A加50ml溶液B,混匀;溶液D:10mlFolin酚
6、试剂加10ml重蒸水混匀。 2.3.2检测精密吸取样品溶液1ml,加入5ml溶液C,混匀,在室温下放置10min,加0.5ml溶液D,混匀,30min后以分光光度计测定吸光值,检测波长为650nm。 2.3.3标准曲线的制备分别精密吸取1.0ml系列对照品溶液于具塞试管中,以1.0ml蒸馏水作空白对照,Lo波长处测定吸收度。以牛血清蛋白对照品浓度(C)为横坐标,吸收度(A)为纵坐标,绘制标准曲线,并根据标准曲线计算蛋白含量。 2.4SS小鼠模型的制备用灭菌PBS将抗原稀释成800μg/ml,加等量弗氏完全佐剂,使抗原变为40
7、0μg/ml的油水混合乳剂,第0天,模型组、羟氯喹组、大、中、小剂量组小鼠每侧腹股沟酒精消毒后注射0.05ml,即每只小鼠注射0.1ml抗原。第14天,用弗氏不完全佐剂将抗原调整为400μg/ml,小鼠每侧腹股沟酒精消毒后注射0.05ml。正常组小鼠注射0.1mlPBS加佐剂。在第2天及第7天,各只小鼠腹腔注射0.05ml白百破联合疫苗。 2.5检测指标 2.5.1小鼠体质量、摄食量、饮水量的测定每2天称小鼠体质量,每2天加饲料100g,加水100ml,2d后称量剩余饲料量及水量,投入的饲料量或水量分别减去剩余饲料量或剩余水量
8、即为每2天每笼小鼠摄食量及饮水量。 2.5.2小鼠唾液流量的测定每周测定每只小鼠唾液流量,测定前禁食1h,不禁水。测定前做好棉球称干重,重量范围4.5~5.0mg。测唾液分泌时将已经称好干重的棉球放入实验小鼠口颊内,5min后取出,电子天平上称湿
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