气阴双补法对干燥综合征小鼠的实验研究

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1、气阴双补法对干燥综合征小鼠的实验研究【摘要】目的研究气阴双补法对干燥综合征小鼠的作用。方法将60只Bacb/C小鼠，按体质量随机分为6组，每组10只，即正常组，模型组，羟氯喹组，增液布津汤小剂量组、中剂量组和大剂量组。对照组用羟氯喹片剂，观察体质量、摄食量、饮水量、唾液流量、脾指数及颌下腺病理形态学变化。结果增液布津汤能有效缓解口干、口腔烧灼感、眼干、眼异物感、鼻干等临床症状。实验室检查方面能增加唾液流量及泪流量，病理显示能抑制淋巴细胞浸润。结论运用气阴双补不仅能缓解干燥综合征小鼠临床症状，而且能纠正免疫紊乱,疗效优于对照组。【关

2、键词】气阴双补；干燥综合征；小鼠　　Abstract：ObjectiveToresearchthefunctionofthemethodofnourishingboth"qi"andbloodonthemicehavingSS.MethodsPutthe60Bacb/Cmiceinto6groupsaccordingtothEir,thereiceineachgroup.Thegroupsincludedthenormalgroup,themodelgroup,thehydroxychloroquinegroup,theloidd

3、leandhighdosegroupusingZengyeBujinDecoction.A，USA，Lot：075K8915；吸附无细胞百日咳、白喉、破伤风联合疫苗，成都生物制品研究所，批号：200503171。PBS磷酸盐缓冲液，0.01M，pH7.2～7.4，中杉金桥，批号：ZLI9061；牛血清白蛋白，南京生兴生物技术有限公司，Amresco分装，Lot：1105S02；MouseIFNγELISAKIT，晶美生物工程有限公司，Lot：FMK0003；MouseIL4ELISAKIT，晶美生物工程有限公司，Lot：F

4、MK0005。　　1.4仪器FA2104上皿电子天平，上海精科；XICROPALTEREADER。　　2方法　　2.1分组及给药60只Bacb/C小鼠，按体重随机分为6组，每组10只。临用前分别将上述药物用生理盐水配成以下浓度：正常组：生理盐水10ml/kg；模型组：生理盐水10ml/kg；羟氯喹组：0.1g/kg；增液布津汤小剂量组：0.05g/kg；增液布津汤中剂量组：0.075g/kg；增液布津汤大剂量组：0.10g/kg。且小鼠灌胃体积为10ml/kg。各组均在第0天即开始给药。　　2.2抗原的制备取8只Bacb/C小鼠，

5、脱颈椎处死，75%酒精浸泡10min，在无菌操作台上解剖颈部，取出两侧颌下腺，分离包膜及结缔组织，用氯化钠注射液洗净，置无菌滤纸上吸干，称重，用显微剪剪碎，每0.1g置入10ml无菌试管中，加氯化钠注射液2ml，在冰浴中用匀浆器以5000r/min匀浆20s，4℃低温离心机中3000r/min离心20min，弃去上层脂质，吸出上清液，置10ml无菌试管中，以上操作均在低温下进行。　　2.3Lol；溶液B：2gNa2CO3、0.4gNaOH加重蒸水至100ml；溶液C：1ml溶液A加50ml溶液B，混匀；溶液D：10mlFolin酚

6、试剂加10ml重蒸水混匀。　　2.3.2检测精密吸取样品溶液1ml，加入5ml溶液C，混匀，在室温下放置10min，加0.5ml溶液D，混匀，30min后以分光光度计测定吸光值，检测波长为650nm。　　2.3.3标准曲线的制备分别精密吸取1.0ml系列对照品溶液于具塞试管中，以1.0ml蒸馏水作空白对照，Lo波长处测定吸收度。以牛血清蛋白对照品浓度（C）为横坐标，吸收度（A）为纵坐标，绘制标准曲线，并根据标准曲线计算蛋白含量。　　2.4SS小鼠模型的制备用灭菌PBS将抗原稀释成800μg/ml，加等量弗氏完全佐剂，使抗原变为40

7、0μg/ml的油水混合乳剂，第0天，模型组、羟氯喹组、大、中、小剂量组小鼠每侧腹股沟酒精消毒后注射0.05ml，即每只小鼠注射0.1ml抗原。第14天，用弗氏不完全佐剂将抗原调整为400μg/ml，小鼠每侧腹股沟酒精消毒后注射0.05ml。正常组小鼠注射0.1mlPBS加佐剂。在第2天及第7天，各只小鼠腹腔注射0.05ml白百破联合疫苗。　　2.5检测指标　　2.5.1小鼠体质量、摄食量、饮水量的测定每2天称小鼠体质量，每2天加饲料100g，加水100ml，2d后称量剩余饲料量及水量，投入的饲料量或水量分别减去剩余饲料量或剩余水量

8、即为每2天每笼小鼠摄食量及饮水量。　　2.5.2小鼠唾液流量的测定每周测定每只小鼠唾液流量，测定前禁食1h，不禁水。测定前做好棉球称干重，重量范围4.5～5.0mg。测唾液分泌时将已经称好干重的棉球放入实验小鼠口颊内，5min后取出，电子天平上称湿