苗药八爪金龙半仿生提取工艺优选及其提取物抑菌活性研究

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1、苗药八爪金龙半仿生提取工艺优选及其提取物抑菌活性研究作者：王瑞，刘晓燕，马立志，高蓬明，徐洪【摘要】目的通过均匀设计法优选八爪金龙半仿生提取工艺条件，并对其提取物的抑菌活性进行研究。方法以岩白菜素含量、HPLC总面积、干浸膏得率为指标，进行综合评判，并将3种工艺提取物的抑菌活性进行比较。结果最佳半仿生提取工艺为八爪金龙加8倍、8倍、6倍水提取3次，3次煎水pH值分别为2.0，6.5，9.0；提取时间依次为85，40，20min。综合评价Y值及抑菌活性顺序为：醇提取法>半仿生提取法>水提法。结论优选出的半仿生工艺是可行的，且优于水提工艺。【关键

2、词】八爪金龙；半仿生提取；工艺条件；抑菌活性　　Abstract：ObjectiveToobtainthebestextractionconditionofsemi-bionicforArdisiacrenataSimsbyuniformdesignandstudyitsantibacterialactivity.MethodsThesemi-bionicextraction(SBE)conditionsizedbyprehensiveevaluationarkers.Theantibacterialactivitiesofextractsfromthr

3、eedifferentprocessessesasmuchasitfor3times;thepHvaluesoftheein.TheorderofprehensiveevaluationvalueandantibacterialactivitiesizationofSBEmethodofArdisiacrenataSimsbyuniformdesignisavailableandbetterthan(钻石)C18(250mm×4.6mm,5μm)；PHS2-3C型精密pH计(上海雷磁仪器厂)；AUY高压蒸气灭菌锅(基因公司)；B-1360B生物洁净工作台

4、(广东半球仪器厂)；GNP-9000系列生化培养箱(嘉兴中新医疗仪器公司)。　　八爪金龙样品于2006-12采集于贵阳市乌当区，经贵阳学院生物教研室高蓬明副教授鉴定为紫金牛科朱砂根ArdisiacrenataSims植物，规范炮制。岩白菜素标准品(中国药品生物制品检定所，批号为：111532-2002-02)；甲醇(美国TEDIA公司，色谱纯)；水为娃哈哈纯净水；大肠杆菌(Escherichiacoli.)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococusaureus)由贵州大学生命科学院提供。抑菌活性实验中所

5、使用培养基为牛肉膏蛋白胨培养基。其余试剂均为分析纯。　　2方法　　2.1分析方法确立　　2.1.1干浸膏得率干浸膏得率（%）=干浸膏质量八爪金龙粉末质量×100%　　2.1.2岩白菜素含量测定色谱条件［7］：色谱柱为DiamonsilTM(钻石)C18(250mm×4.6mm,5μm)；流动相为甲醇-水(25∶75)，检测波长275nm，流速1ml·min-1。每次进样之前用流动相平衡10min。按该色谱条件下理论板数以岩白菜素峰计算不低于2900，分离度不低于1.5。对照品及样品谱图见图1～4。对照品溶液及标准曲线的制备：精密称取岩白菜素对照品并用甲醇

6、溶解、配成1.0mg/ml的对照品溶液。将对照品溶液依次配成0.05，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mg/ml的混合溶液。依次精密吸取10μl进行分析。以岩白菜素的进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程：Y=54.34X+1.65，(r=0.9992)，表明岩白菜素的进样量在0.5～10μg成良好线性关系。样品溶液的制备：精密称取八爪金龙样品0.1g，置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,称定重量，超声处理30min，放冷，用甲醇补足重量，摇匀，微孔滤膜(0.45μm)过滤，即得，避光保存。精密度实验：精密吸取质量

7、浓度为1.0mg/ml的对照品溶液10μl，重复进样5次，RSD为1.97%(n=5)，表明精密度较好。稳定性实验：取同一份样品溶液，分别在0，4，8，10h进样，岩白菜素含量RSD为2.16%，表明样品至少在10h内稳定。　　重复性实验：取同一份样品，精密称量，按“样品溶液的制备”方法制备样品溶液5份，分别进样，测定岩白菜素含量，RSD分别为2.24%(n=5)，表明重复性良好。　　2.2八爪金龙不同工艺提取物的制备　　2.2.1水提(］.贵阳：贵州人民出版社,1998:411.　　［2］边宝林,王素芬,杨健,等.朱砂根及同属植物中三萜总皂苷及制备方法

8、［P］.中国专利，1270174.2000.10.18.　　［3］Piacent