老年缺血性脑卒中患者enos基因vntr多态性研究

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1、老年缺血性脑卒中患者eNOS基因VNTR多态性研究【摘要】　　目的探讨老年缺血性脑卒中与内皮细胞型一氧化氮合酶（eNOS）基因变数串联重复序列（VNTR）多态性的关系。方法选择老年缺血性脑卒中患者112例作为病例组，同期选择年龄与性别相匹配的健康志愿者或其他住院患者105例作为对照，通过PCR技术和聚丙烯酰胺电泳来确定其基因型。结果病例组eNOS基因ab基因型的频率明显高于对照组(22.3%vs12.4%，P＜0.05)，a等位基因的频率也高于对照组（12.9%vs7.0%，P＜0.05）。结论ab基因型与老年缺血性脑卒中有相关性，a等位基因可能是中国老年缺血性脑卒中的独立危险因素。【关

2、键词】一氧化氮合酶；基因多态性；VNTR；老年；缺血性脑卒中　　血管内皮细胞一氧化氮合酶（NOS）编码基因存在多种基因多态性。其中，第4号内含子27个碱基的变数串联重复序列（VNTR）多态性与血浆一氧化氮（NO）水平密切相关，该多态性与心脑血管病的相关性研究较多，但结论并不一致。Matyar等〔1〕研究发现内皮细胞型NOS(eNOS)4a/b基因多态性是南部土耳其人冠心病的独立危险因素，而Vasilakou等〔2〕发现在希腊人中该基因多态性与早发的冠心病没有相关性。本研究的目的是探讨eNOS基因VNTR多态性与中国老年缺血性脑卒中的关系。　　1对象与方法　　1.1研究对象　　1.1.1入

3、选标准　　选择2002年7～12月在青岛大学医学院附属医院住院的112例老年缺血性脑卒中患者作为病例组,其中36例短暂性脑缺血发作(TIA)，76例脑梗死，均行头颅MRI和/或CT扫描明确诊断，符合1996年第四届全国脑血管病会议修订的诊断标准，并排除脑出血和占位性病变。选取同期住院的其他疾病患者和健康志愿者105例作为对照。对照组均无脑卒中或冠心病病史。病例组平均年龄(64.9±11.2)岁，男62例；对照组平均年龄(63.9±11.9)岁，男53例，两组的年龄与性别相匹配,入选对象均行血糖、血脂等检查。　　1.1.2诊断标准　　高血压的诊断标准为血压≥140/90mmHg或正服用降压

4、药物；糖尿病的标准为空腹血糖≥7.0mmol/L或服用降血糖药物；吸烟的标准为正在吸烟>5支/d或有吸烟史，血脂异常的标准为总胆固醇(TC)≥5.62mmol/L和/(或)甘油三酯(TG)≥1.92mmol/L或服用降血脂药物。　　1.2方法　　1.2.1提取基因组DNA　　入选者均于清晨空腹抽取静脉血1ml,加20μlEDTA（浓度150ng/ml）抗凝，4℃冰箱短期存放。采用UltraPureTM基因组DNA提纯试剂盒（北京赛百盛公司生产），提取的基因组DNA置于-20℃保存。　　1.2.2目的基因片段PCR扩增方法　　引物参照Uin后进入循环，每个循环为：变性94℃45s，退

5、火56.5℃45s，延伸72℃45s，35个循环后72℃延伸12min终止反应。取3μlPCR扩增产物在6％非变性聚丙烯酰胺凝胶上做垂直电泳，电压60V，时间3h，以pGEM7Zf(+)HaeⅢMarker（华美公司生产）为参照,在0.5μg/ml溴化乙锭染液中染色40min后在紫外线灯下观察结果并照相。　　1.3统计学分析　　采用SPSS统计软件，计量资料组间比较用非配对的t检验，计数资料组间比较用χ2检验，应用Logistic回归分析计算比数比并进行危险因素独立性分析。　　2结果　　2.1病例组与对照组各种危险因素比较　　吸烟、高血压、糖尿病等在病例组的比例均较对照组高（P<

6、0.05）。血脂异常发生率在病例组也较高，但无显著性差异（P>0.05），见表1。表1两组各危险因素的比较〔n(略)〕　　2.2eNOS基因VNTR多态性电泳结果　　eNOS基因VNTR多态性主要有2种等位基因，27bp的序列重复4次为a，重复5次为b，在电泳图中分别为417bp和444bp的片段，从而构成3种基因型(aa，ab，bb)，见图1。　　2.3两组eNOS基因型和等位基因频率的比较　　病例组与对照组的ab基因型频率分别为22.3%和12.4%，两者比较有显著差异(P<0.05)。a等位基因频率在病例组为12.9%，较对照组(7.0%)明显偏高（P<0.05)

7、，见表2。表2卒中组与对照组的基因型及等位基因频率比较〔n(略)〕　　2.4病例组各种危险因素的独立性分析　　病例组各危险因素及eNOSVNTR多态性的比数比（OR）分析及95％可信区间（95%CI），见表3。通过对各种危险因素的多元Logistic回归分析发现，高血压、糖尿病、吸烟及ab基因型与老年缺血性脑卒中均明显相关，是老年缺血性脑卒中的独立危险因素。表3病例组各危险因素以及ab基因型的OR值及95％CI（略）　　3讨论　NO