毛细管区带电泳分离和检测利多卡因方法的研究

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1、毛细管区带电泳分离和检测利多卡因方法的研究作者；马汉祥，刘红，吕淞，高改莉，施伟忠，李锋【摘要】目的建立毛细管电泳分离和检测利多卡因的方法。方法毛细管区带电泳分离利多卡因，电泳分离条件：30mmol/LNaH2PO4-H3PO4（pH=5.0）缓冲液。先采用压力（20psi）进水5s，随后电动进样（8kV，5s），检测波长200nm，运行电压30kV，温度20℃，运行时间5min。结果在0.1～12.5μg/ml范围内呈良好的线性关系和重现性（R2=0.9998，n=5），回收率96.80%～105.8%，日内及日间精密度(RSD)均小于6%。

2、方法的检测限10ng/ml。结论本方法简便、快速、灵敏，为利多卡因的定量测定提供了新的、更为理想的方法学手段。【关键词】毛细管区带电泳；分离；利多卡因【Abstract】ObjectiveToestablishcapillaryzoneelectrophoresismethodforthedeterminationandseparationoflidocaine.MethodsDeterminationandseparationoflidocainebycapillaryzoneelectrophoresis(CZE)andelectropho

3、resisconditionsmol/LNaH2PO4-H3PO4solution(pH=5.0)，theperatureat20℃，UVdetectionat200nm，samplinginjected5secondsethodhadagoodlinearityandprecisionl(R2=0.9998).Therangeofrecoveryitl.ConclusionThisassayple，rapidandsensitive.Itisaneeansforthedeterminationoflidocaine.【Keyg，其血药浓度达2

4、～4μg/ml。当血药浓度超过5μg/ml时出现中毒症状，超过7μg/ml时出现惊厥［1］，因此其血药浓度监测具有重要的临床意义。以往多采用酶免疫分析法［2］、气相和高效液相色谱法［3］。但成本高，操作繁琐，干扰多，色谱柱易受污染等。而毛细管电泳（Capillaryelectrophoresis，CE）是20世纪90年代以来迅速发展起来的一种新型的分离检测手段，具有分离效率高、分析速度快、样品用量少、运行成本低、预处理简单以及应用范围广等技术优势，已在生物医药领域获得了许多成功的应用［4］。本研究结合利多卡因的结构特点，选用毛细管区带电泳（CZ

5、E）分离模式，优化缓冲体系、pH值、检测波长、分离电压和温度等条件，建立了适合利多卡因定量测定的CZE方法。1材料与方法1.1仪器与试剂毛细管电泳仪：美国Beckman公司P/ACE5000型配有紫外吸收（UV）、二极管阵列（PDA）和Beckman工作站；毛细管为涂层石英毛细管，57cm×75μm（河北永年光纤厂），有效长度50cm；PHS-3B精密pH计（上海精密科学仪器有限公司）；SB2200T超声波洗涤装置（必能超声上海有限公司）。利多卡因（针剂，0.1g/5ml，山东兖州益健制药有限公司批号：0407182）；利多卡因标准品（宁夏医学

6、院附属医院制剂中心批号：030408）。NaH2PO4、H3PO4、HCI和NaOH等试剂均为国产分析纯，水为自制双蒸去离子水。1.2样品溶液和缓冲液的制备1.2.1标准品及样品溶液的配制准确称取利多卡因标准品10mg，用双蒸去离子水溶解至100ml。分别配制浓度为12.5、6.25、2.5、0.5和0.1μg/ml标准溶液，用双蒸去离子配制不同浓度的利多卡因样品。用0.45μm微孔过滤器过滤，超声波脱气5min后备用。1.2.2运行缓冲液的配制精密称取NaH2PO4适量，加水制成15～40mmol/LNaH2PO4。用H3PO4和NaOH将其

7、pH值分别调为4.4、4.6、4.8、5.0和5.2低温贮备。1.3实验条件的选择开机后，以1mol/LHCI、0.1mol/LNaOH溶液、水及NaH2PO4-H3PO4缓冲液冲洗毛细管各3min，两次进样之间以0.1mol/LNaOH溶液、水及缓冲液冲洗毛细管3min后进样：先采用压力（20psi）进水5s，随后电动进样（8kV，5s），运行时间5min。以迁移时间、峰高、峰面积的重现性和峰形的对称性作为分离效果的判断依据，综合上述参数优化实验条件。1.3.1缓冲体系根据利多卡因的理化性质及缓冲液的选择原则，选择NaH2PO4-H3PO4为

8、实验的缓冲体系。再以1.2.2项配制的缓冲液选择最佳运行缓冲液浓度和pH值。1.3.2检测波长及进样条件根据利多卡因的理化性质，以PDA检测器进行扫描