家兔助孕模型的研究

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1、家兔助孕模型的研究作者：吕静1，计垣1，荣颖1，王洁心2，叶联顺【摘要】目的了解三种培养基对兔精子体外培养的效果及不同超数排卵药物与雌兔超排结果和生殖激素水平变化的关系。方法采用精液在三种培养基中培养的实验。对雌兔肌注PMSG75u或HMG20u2天，第2天肌注HCG80u超排试验。采用化学发光仪测定雌兔生殖激素。结果三种培养基的精子活率24h均无差异，但48和72h在B199液中有差异。注射PMSG的雌兔平均卵子数为7.8个，胚胎数为6.6个；注射HMG的雌兔平均卵子数为15个，胚胎数为25个。注射PMSG或HMG后FSH、LH、P有较显著升高，E2-6也有升高，T无明显变化。结论BG的超

2、排效果优于PMSG。肌注HMG或PMSG对雌兔FSH、LH、E2-6、P的平均水平变化有关。【关键词】兔；精液；促性腺激素；超数排卵；生殖激素【Abstract】ObjectiveToobserverabbitspermcultureinthreedifferentculturemediaandfindoutthecorrelationbet.MethodsThesemenediaplacedinaculturemachineperatureoilluminancesystem.ResultsInallthethreeculturalmediathemotilityofthespermrem

3、ainedthesameat24hours.At48and72hours，hootalitydifferedinB199at24，48and72hours.AftertheinjectionofPMSG，7.8eggsand6.6embryoseachrabbitonaverage.AftertheinjectionofHMG，anaverageof15eggsand25embryosainedalmostthesame.ConclusionBGleadstomoresuperovulationthanPMSGdoes.TheintramuscularinjectionofHMGorPMSG

4、correlates.【Keyen；gonadotrophin；superovulation；reproductivehormone人类对于动物生殖的调控能力，是随着对动物生殖生理认识、了解的增加以及相关学科的发展而逐渐提高的［1］。选择优良的精子既能显著提高繁殖率，又能节省高昂的费用。为了选择有效、方便、经济的培养基，笔者对B199培养基进行了对比实验研究。超数排卵是胚胎生物工程中一个重要环节。本研究对雌性新西兰大耳白兔肌肉注射孕马血清促性腺激素（PMSG）或尿促性腺激素（HMG）进行超数排卵［2］，并以获取的卵子数和胚胎数为指标，分析使用这两种促性腺激素的超排结果，同时记录回收卵、回收胚

5、的最佳时间，为体外授精、胚胎的获取和植入提供临床依据。使用不同超数排卵药物后雌兔生殖激素水平变化的报道甚少。本研究在超排结果研究的同时进行了雌兔使用HMG或PMSG前后血清FSH、LH、E2-6、P和T的测定，以了解超数排卵药物对生殖激素水平的影响以及生殖激素与超数排卵的关系。1材料与方法1.1家兔精子培养基的筛选1.1.1材料新西兰大耳性成熟兔，由第三军医大学实验动物中心提供，雄兔体重3.4±0.4kg，雌兔体重3.2±0.2kg，分笼饲养。1.1.2方法采用假阴道法采集精液，精液放入37℃恒温水浴箱中，液化，分成三份，分别加到2ml的B199培养基中，37℃爬高30min，取上清液、离心

6、，用三种各自的培养基洗涤两次取沉淀物，精子浓度调为10×106/ml，37℃培养，分别在24h、48h和72h离心、换液，制备细胞悬液，镜下观察精子活率和活力。1.2家兔超排、卵及胚胎的回收、囊胚的植入1.2.1材料新西兰大耳白雌兔（来源同1.1.1）40只，兔龄6～12月。实验前随机分成两组，Ⅰ组10只，PMSG超排。Ⅱ组30只，HMG超排。雄兔6只，都具有生育力（其中2只结扎，用于假孕兔诱导排卵），另外4只有过生育史的雌兔作受体兔。1.2.2方法1.2.2.1超排处理采用两种方法，一种为PMSG+HCG法，每次实验选Ⅰ组2只发情雌兔，每天肌肉注射PMSG(75u)1次，连续2天，第3天肌

7、肉注射HCG80u，立即与雄兔合笼交配。其中1只用于取卵（与结扎雄兔合笼），另1只用于取胚。另一种为HMG+HCG法，每次实验选Ⅱ组4只发情雌兔，分别每天肌肉注射HMG(20u)1次，连续2天，第3天肌肉注射HCG80u，立即与雄兔合笼交配。其中2只用于取卵（与结扎雄兔合笼），另2只用于取胚。1.2.2.2卵子的回收分别将合笼后15h的Ⅰ组和Ⅱ组实验兔处死。剖腹取出双侧卵巢、输卵管、子宫、阴道组织。用文镊固定