甲基莲心碱对乳腺癌mcf7-adr细胞mdr逆转的研究

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1、甲基莲心碱对乳腺癌MCF7/Adr细胞MDR逆转的研究【摘要】目的探讨甲基莲心碱（Neferine,Nef）对耐药人乳腺癌细胞增殖，细胞内ADM积聚浓度及mdr1/Pgp表达的影响。方法采用MTT法测定细胞毒作用，高效液相色谱法测定细胞内ADM积聚浓度，RTPCR技术及蛋白质印迹技术检测mdr1/Pgp表达。结果10μg/mlNef+ADM组细胞的抑制率及细胞内ADM积聚浓度比ADM组高(P<0.01)；20μg/mlNef+ADM组细胞抑制率及细胞内ADM积聚浓度较5μg/ml异博定+ADM组及10μg/mlNef+

2、ADM组均高(P<0.01)。10μg/mlNef+ADM组MCF7/Adr细胞mdr1mRNA及Pgp表达比ADM组明显下降（P<0.01）。20μg/mlNef+ADM组细胞mdr1mRNA及Pgp表达较10μg/mlNef+ADM组明显下调（P<0.01）。结论Nef能抑制耐药人乳腺癌细胞增殖。Nef能增加MCF7/Adr细胞内ADM积聚浓度。Nef通过降低耐药人乳腺癌细胞mdr1mRNA及Pgp的表达逆转MDR。【关键词】甲基莲心碱；多药耐药；P糖蛋白；MCF7/Adr细胞　　TheStud

3、yofNeferineonMultidrugResistanceReversingoftheHumanBreastCancerCellLineMCF7/Adr　　Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectofneferine(Nef)ontheproliferation,intracellularADMconcentrationandtheexpressionofmdr1/PgpinhumanbreastcancercelllineMCF7/Adr.MethodsMTTmethodancel

4、iquidchromatographydr1/Pgpexpression.ResultsTheinhibitingrateandintracellularADMconcentrationof10μg/mlNefaddingADMgrouplNefaddingADMgrouplverapamiladdingADMgroupand10μg/mlNefaddingADMgroup(P<0.01).Themdr1mRNAandPgpexpressionof10μg/mlNefaddingADMgrouplADMgroup（P<

5、;0.01）.Themdr1mRNAandPgpexpressionof20μg/mlNefaddingADMlNefaddingADMgroupgroup（P<0.01）.ConclusionNeferinecaninhibittheproliferationofhumanbreastcancercelllineMCF7/Adr.NeferinecanimprovetheintracellularADMconcentration.Neferinecanreducemdr1mRNAandPgpexpressionandc

6、onsequentlyreverseMDR.　　Keydr1/Pgp表达增加。尤其是MDR患者高表达。肿瘤MDR逆转已成为肿瘤化疗亟待解决的问题。中药抗白血病历史悠久，其有效成分在与化疗联合应用的过程中有着较好的减毒增效作用。我们既往研究发现甲基莲心碱（Neferine，Nef）具有化疗增敏作用[1]。本研究以MCF7/Adr细胞株为研究对象，探讨甲基莲心碱对耐阿霉素人乳腺癌细胞株的逆转作用。　　1材料与方法　　1.1主要试剂　　阿霉素(Adriamycin，ADM)：意大利PharmaciaandUpjohn公司产；异博定(Ve

7、rapamil)：上海禾丰制药有限公司产；Nef：由华中科技大学同济医学院药理学教研室惠赠；噻唑蓝（MTT）购自Sigma公司；P糖蛋白（PglycoprotEIn，P170）单抗：购自美国NeoMarkers公司；Trizol：购自美国Invitrogen公司；RTPCR试剂盒：购自美国MBI公司；化学发光检测试剂购自美国PERCE公司。mdr1及βactin上、下游引物均由上海申友生物技术有限责任公司合成。　　1.2实验细胞　　MCF7/Adr细胞由中南大学湘雅医学院细胞中心提供。在1.0μg/μl浓度ADM中培养维持其

8、耐药性，脱ADM半月后进行实验。所有的细胞均接种于含10％小牛血清的RPMI1640培养体系中，置于37℃、体积分数为5％的CO2、95％湿度的条件下培养，每隔3～4天传代1次。　　1.3实验方法　　1.3