加味四君子汤对小鼠肠道免疫功能调整作用的研究

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1、加味四君子汤对小鼠肠道免疫功能调整作用的研究【摘要】　　目的观察加味四君子汤和思密达对小鼠肠道免疫功能的调整作用。方法盐酸林可霉素灌胃建立小鼠肠道菌群失调及免疫功能紊乱模型。昆明种鼠随机分6组，正常对照组、自然恢复组、造模组、思密达组、加味四君子汤组和两药合用组，分别进行肠道菌群检测、小肠黏液中sIgA的测定、血清中IL-2的测定及肠通透性(尿液中乳果糖与甘露醇比值)的检测。结果盐酸林可霉素灌胃3d小鼠，肠道菌群失调，sIgA从正常对照组的14.54mg/ml增加到18.70mg/ml，IL-2从正常对照组的1186.65mg/ml降低到1

2、111.58mg/ml、L/M从正常对照组的1.27增加到1.37mg/ml。实验组分别给加味四君子汤、思密达及两药合用后，肠道菌群得以调整，sIgA含量从18.70mg/ml降低到14.52mg/ml，IL-2的含量从1111.58mg/ml增加到1189.58mg/ml，肠黏膜通透性减小。各治疗组间比较，加味四君子汤和思密达合用组优于加味四君子汤组和思密达组。结论加味四君子汤和思密达均能修复受损黏膜，有调节肠道免疫功能的作用，但加味四君子汤在调整失调的菌群方面优于思密达，两药合用给药则能起到最佳效果。【关键词】肠道菌群；加味四君子汤；肠

3、道免疫；肠通透性正常肠道屏障功能依赖于肠黏膜上皮屏障、肠道免疫系统以及肠道的正常微生物的平衡［1］。近年来，很多学者开始研究四君子汤对肠道菌群的调整作用，鞠宝玲、李俭等［2，3］研究表明四君子汤可以改善脾虚大鼠胃肠黏膜的异常形态，使其恢复正常，并对双歧杆菌和乳酸杆菌有明显的增菌作用，从而调节肠道菌群失调，治疗由肠道菌群失调导致的一系列疾病，李莉等［4］研究了加味四君子汤对肠道菌群失调小鼠的调整作用，效果显著。本文探讨山药加入四君子汤对肠道菌群的调整及机体免疫功能的调整作用。　　1材料与仪器　　1.1动物清洁级昆明种小鼠（合格证号：SCXK2

4、005-0001），体质量18～22g，雌雄各半，由河南省实验动物中心提供。　　1.2药物与试剂盐酸林可霉素（300g/L）,上海旭东海普药业有限公司，批号：070509；思密达，博福-益普生制药有限公司，批号：S0293；中药：人参、山药、白术、茯苓、甘草，购于张仲景大药房，将上述中药按2∶2∶2∶2∶1混合，水提取，过滤浓缩至1g/ml生药量；生理盐水，山东鲁抗辰欣药业有限公司；乳果糖（辽宁省丹东市康复制药厂）；甘露醇（北京化工厂，进口分装）；甲基甘露糖苷（SIGMA）；吡啶（FLUKA）；羟基盐酸盐（SIGMA）；n-三甲基硅烷咪唑（

5、SIGMA）　　1.3培养基EMB（伊红美兰培养基），用于肠杆菌的分离培养；EC（肠球菌选择性培养基）；LBS（乳酸杆菌选择性培养基）；BD（类杆菌选择性培养基）；Blb（双歧杆菌选择性培养基），培养基的配制参考　　3结果　　3.1肠道菌群的定量检测见表1。小鼠经盐酸林可霉素灌胃后，与正常对照组相比，5种肠道菌群发生显著变化，其中双歧杆菌、乳酸杆菌、肠杆菌数量显著降低，而肠球菌、类杆菌数量有所升高。经各组治疗后，各种细菌基本恢复到正常水平，其中加味四君子汤组效果最好，与正常对照组已无差异（P＞0.05）。表1小鼠经盐酸林可霉素灌胃和药物处理

6、后肠群检测结果(略)　　3.2sIgA和IL-2的测定结果见表2。小鼠经盐酸林可霉素灌胃后，sIgA增高，IL-2降低，经加味四君子汤和思密达治疗后，sIgA和IL-2的含量趋于恢复到正常水平，其中以加味四君子汤和思密达组恢复的最好。　　3.3尿液中L/M的测定正常对照组的小鼠尿液中L/M的峰面积比值为1.27（54494.88±1269.08/42973.02±1266.39）。结果见图1，而灌胃3d盐酸林可霉素后，L/M的峰面积值升高到1.37（58894.883±1627.90/42988.966±741.20）。见图2。表2小鼠经盐

7、酸林可霉素灌胃和药物处理后小肠黏液sIgA和血清IL-2含量测定结果(略)　　4讨论乳果糖通过小肠黏膜上皮细胞的紧密连接处吸收，乳果糖的吸收与小肠黏膜上皮细胞的紧密连接完整程度成反比；甘露醇通过小肠上皮细胞膜上的水溶性微孔吸收。两者在小肠内不代谢，直接吸收入血，然后由尿中排出，可从尿中进行定量测定其吸收量。如果尿中L/M的值升高，即表明上皮细胞间的结构已发生改变，黏膜的通透性增加。本文结果表明，小鼠经盐酸林可霉素灌胃后，L/M值增高，黏膜有损。经加味四君子汤和思密达治疗后，L/M值又降低到正常水平，黏膜的通透性降低。黏膜通透性降低表明破损的

8、黏膜已经基本得到修复，这与肠道菌群的调整也有很多关系。近年来，国外学者［7］采用多种糖来检测胃肠道黏膜的通透性，其中比较常见的为三氯蔗糖，它可以全面反映胃肠道的通透性，对于其在本