急性白血病骨髓基质细胞connexin 43的表达及细胞间通讯功能研究

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1、急性白血病骨髓基质细胞Connexin43的表达及细胞间通讯功能研究作者：刘耀，张曦，司英健，高蕾，高力，陈幸华【摘要】本研究探讨急性白血病和正常骨髓基质细胞中连接蛋白43（connexin43,Cx43)的表达及细胞间隙连接通讯（gapjunctionintercellularmunication,GJIC）功能的变化及二者细胞通讯功能之间的差异。体外培养正常及急性白血病骨髓基质细胞，采用细胞免疫组织化学方法及计算机灰度检测观察二者之间Cx43表达的变化，采用细胞划痕染料传输技术比较两者之间GJIC功能的差异。结果显示，体外培养的急性

2、白血病骨髓基质细胞Cx43的表达较正常骨髓基质细胞Cx43的表达明显减低，GJIC功能减弱。结论：急性白血病骨髓基质细胞间通讯功能较正常骨髓基质细胞明显减低。【关键词】急性白血病Connexin43ExpressionandInteracellularmunicatingFunctioninAcuteLeukemiaBoneMarroaCellsAbstractThisstudyiabonemarroalcells（ABMSCs）andnormalbonemarroalcells(NBMSCs),andtoexplorethediffe

3、renceinmunicatingfunctionsbetmunohistochemistryandputergrayscaleassay，andthedifferenceofgapjunctionintercellularmunication（GJIC）inedthroughdrytransfertechnique.Theresultsshounicationfunctionisloia;bonemarroalcell造血基质细胞所形成的造血微环境(hematopoieticmicroenvironment，HME)是造血干/祖细胞定

4、殖、分化、发育和成熟的场所［1］。它对造血细胞的自我更新、增殖和分化过程起着重要的调节作用。间隙连接是细胞膜上的连接通道结构，由间隙连接蛋白(connexin，Cx)亚单位构成,它所介导的细胞间隙连接通讯(gapjunctionintercellularmunication,GJIC)在细胞间传递信号和能量，调控细胞的生长、增殖、分化和形态发生等内环境的稳定。细胞间隙连接通讯功能缺陷与肿瘤的增殖失控和恶性表型的发生有关。人骨髓基质细胞专一表达Cx43［2］，其对造血微环境间隙连接通讯功能的调节尚未见报道，对其在造血系统恶性疾病中的表达差

5、异尚未完全明了。我们采用Cx43抗体免疫荧光染色和划痕标记染料传递方法研究Cx43在正常及急性白血病患者骨髓基质细胞中表达及差异，并对GJIC功能的改变进行讨论。材料和方法标本来源10例骨髓穿刺抽吸标本均取自我院血液科患者，其中急性白血病骨髓标本5例（ALL2例，ANLLM32例，ANLLM51例）；非血液系统恶性疾病骨髓标本5例（ITP2例,正常标本2例，IDA1例）。主要仪器设备二氧化碳培养箱(SHELD2M2300型,美国产品)、倒置显微镜(Olympus相差显微镜,日本产品)、骨髓图文报告分析系统（购自重庆市天海医疗设备有限

6、公司）、超净工作台、台式低温离心机等。中国实验血液学杂志JExpHematol2007;15(4)急性白血病骨髓基质细胞Connexin43蛋白的表达及细胞间通讯功能研究主要试剂DMEM/F12培养粉(Gibco公司产品)，Ficoll(1.077g/ml,上海试剂二厂产品)，新生小牛血清(Hyclone公司产品,-20℃冻存)，马血清(第三军医大学临床检验教研室提供，-20℃冻存)，LY(Sigma公司产品)，PBS（第三军医大学临床检验教研室提供），鼠抗Cx43mAb（Zymed公司产品），正常山羊血清（中山生物技术公司产品），SP

7、免疫组织化学染色试剂盒（购自中山生物技术公司），DAB染色试剂盒（购自武汉博士德公司），FITC标记羊抗鼠IgG(Sigma公司产品)。实验分组实验分为正常骨髓基质细胞组（normalbonemarroalcells，NBMSC）和急性白血病骨髓基质细胞组（acuteleukemiabonemarroalcells，ABMSC）。基质细胞分离和培养［3］采集骨髓1ml，用0.9%生理盐水等倍稀释，缓慢加入预先加有2ml淋巴细胞分离液的试管内，400×g离心15分钟，吸取界面层细胞，生理盐水2ml洗涤、450×g离心5分钟，接种于25ml

8、培养瓶内，加入DMEM/F122-3ml(含10%小牛血清，10%马血清，青霉素100U/ml，链霉素100mg/L)，在37℃、5%CO2孵箱中培养，24小时后半量换液，以后每周全量换液。对数生长期细胞传