肝干细胞与干细胞移植治疗急慢性肝病的研究进展

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1、肝干细胞与干细胞移植治疗急慢性肝病的研究进展　　根据肝脏干细胞起源的不同，可将其分为肝源性肝脏干细胞和非肝源性肝脏干细胞，前者包括卵圆细胞、分化的肝细胞、胚胎肝细胞和胆管上皮细胞，后者则为源于胚胎干细胞、骨髓造血干细胞及胰腺上皮干细胞等不同的肝脏干细胞。在特定条件下，造血干细胞和骨髓间充质细胞均可转化成肝细胞。　　1.1胚胎干细胞（embryonicstemcell，ES细胞）ES细胞于早期胚胎,具有多项分化潜能,可以在体内或体外分化为多种组织细胞。Hamazaki等［3］在体外成功地将小鼠ES细胞定向分化为成熟的肝细胞,该细胞能表达AFP、甲状腺转运蛋白、A2抗胰蛋白酶、白蛋白等肝细胞特征。

2、Hu等［4］则在直接观察到体外ES细胞向肝细胞转化的过程中，发现在培养液中体外ES细胞能转化为可分泌AFP、ALB的肝细胞。　　1.2骨髓干细胞骨髓中含有的造血干细胞和间充质细胞具有较强的增生、分化能力。Lagasse等［5］将骨髓组织细胞移植给致死量放射线照射鼠，发现在受鼠肝脏中发现骨髓造血干细胞的成熟肝细胞，提示造血干细胞可以转化为肝细胞。Theise等［6］将正常雄性小鼠骨髓移植到正常雌性小鼠体内，应用荧光原位杂交方法检查雌性小鼠肝脏细胞Y染色体，发现雌性小鼠肝脏的部分肝细胞表达Y染色体，提示骨髓干细胞在正常肝脏环境中能分化为肝细胞。Petersen等［7］将雄性大鼠骨髓干细胞移植到致死

3、量放射性肝损伤且肝细胞增生被抑制的雌性大鼠模型体内，发现该模型大鼠的部分肝脏细胞表达Y染色体，提示骨髓干细胞不仅在正常肝脏环境能分化为肝细胞，而且在肝脏某些病理的环境中也能分化为肝细胞。　　1.3胰腺上皮干细胞胰腺中存在着肝脏前体细胞。SCs）。骨髓中MSCs的含量很低，约为0.001%~0.01%，因此应用MSCs前，需对其进行分离及体外培养扩增。目前常用的分离方法为贴壁筛选法、密度梯度离心法、流式细胞仪分选法和免疫磁珠分离法，其中流式细胞仪分选是目前分离骨髓干细胞的最常用方法之一。　　2.2肝干细胞的分离方法目前分选、纯化肝干细胞的方法有密度梯度离心、流式细胞技术结合免疫荧光标记单克隆技术

4、、免疫磁珠分选技术等,其中密度梯度离心无需特殊仪器及抗体，操作过程简单，可减少复杂操作对细胞活性的损伤，采用proteaseE选择性破坏肝实质细胞［9］，20μm滤膜滤过清除体积较大细胞，后经Percoll密度梯度离心获得高产量及活性率的肝干细胞。　　3急性肝损伤肝干细胞的激活与增殖　　干细胞在肝损伤时具有分化增殖为肝细胞的能力，但给予正常及受损伤的动物干细胞治疗时，发现只在受损伤的动物观察到干细胞的分化与增殖，正常动物肝脏组织并无外源性干细胞生长迹象。说明细胞对于生长信号的反应因损伤的程度大小而异。正常肝脏中，肝干细胞处于休眠期，不分裂增生，当肝干细胞被激活后，必须在适宜的微环境中才能分化成

5、熟。当部分肝细胞死亡和（或）暴露于有毒性物质时，卵圆细胞开始增生、分化为肝细胞，补充丢失或死亡的细胞。此外，造血干细胞只能在肝脏中分化为肝细胞和胆管上皮细胞。肝干细胞的扩增和分化是一个复杂过程，在该过程中，肝脏微环境和多种细胞因子、分化因子的表达起重要作用。Thorgeirsson等经过一系列研究认为参与肝干细胞增生和分化的因子包括干细胞因子及其受体c-kit系统、干扰素γ，肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）。另外，还包括与肝脏再生有关的生长因子:表皮生长因子（EGF）、转化生长因子-β（TGF-β）、肝细胞生长因子（HGF）和成纤维细胞生长因子（FGF）家族等。国内姚鹏

6、等［10］报道HGF,表EGF、FGP能促进骨髓干细胞的增生、分化，TGF-β能诱导骨髓干细胞的凋亡，而TNP-α、IL-6对骨髓干细胞的生长无明显影响。目前很难确定促进和诱导肝干细胞分化及扩增的关键因素，这也是影响肝干细胞临床应用的一个难题。　　4干细胞移植治疗急慢性肝脏疾病　　肝干细胞的移植方法较多，常用方法包括腹腔移植、脾移植、门静脉移植、肝动脉移植等。目前，动物实验进行较广泛，各种途径的移植应用于急慢性肝病的治疗，而临床上主要以肝动脉方式移植最为常用。　　4.1腹腔内移植腹腔是干细胞移植最方便易行的治疗方法，但由于其有效的作用主要是通过肝脏受损伤时干细胞提供的细胞因子的作用，而并非腹腔

7、内干细胞的增殖与分化的作用。且受腹腔内干细胞分化、增殖条件的限制，基本无临床应用前景。　　4.2脾内移植ShiZ等［11］经脾脏进行胚胎干细胞移植治疗Wilson’s病模型鼠，移植后第2、4周，在肝内可见胚胎干细胞的干细胞增殖。说明脾脏内移植的胚胎干细胞有分化为成熟肝细胞的能力。苏娟等［12］采用人胎肝干细胞在小鼠腹腔及脾内移植，移植后观察结果证明了胎肝干细胞能在损伤肝脏中增殖并分化为肝细胞。移植