成神经分化的骨髓间充质干细胞向c6细胞条件培养基和sdf1α的趋化性迁移研究

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1、成神经分化的骨髓间充质干细胞向C6细胞条件培养基和SDF1α的趋化性迁移研究：包普花,王敏,苏军,刘孟宇,张焕相【摘要】目的:探讨成神经分化的骨髓间充质干细胞(BMSCs)向C6细胞条件培养基和SDF1α的趋化性迁移。方法:采用碱性成纤维生长因子(bFGF)、丁羟基茴香醚(BHA)、二甲基亚砜(DMSO)联合诱导剂对BMSCs进行诱导分化,通过免疫荧光染色检测诱导的细胞表达神经前体细胞标志物Nestin、βIIITubulin和NSE的情况。运用Dunnchamber研究成神经分化的BMSCs向胶质瘤和SDF1α的迁移。结果:BMSCs能诱导分化成神经元样细胞

2、,而对照组的BMSCs形态无变化。Dunnchamber分析显示,C6细胞条件培养基组和SDF1α组诱导细胞的迁移速率和迁移效率明显高于对照组,表明C6细胞条件培养基和SDF1α对BMSCs具有趋化作用,单个细胞迁移轨迹实验也证实了这一结果。此外,分化不同状态的BMSCs向C6细胞条件培养基和SDF1α的趋化程度也不同。结论:BMSCs的定向迁移与分化状态密切相关。【关键词】骨髓间充质干细胞;分化;迁移;趋化性　　[Abstract]AIM:Toinvestigatethetropismofbonemarroesenchymalstemcells(BMSCs)in

3、neurogenicdifferentiationforgliomaandSDF1α.METHODS:BHA,bFGF,andDMSOarkers,Nestin,βIIITubulinandNSEmunocytochemistry.SCsinneurogenicdifferentiationtoaandSDF1α.RESULTS:BMSCscouldbeinducedtodifferentiateintoneuronlikecells,ainedthemorphologyofBMSCs.Dunnchamberanalysisrevealedthatbothth

4、emigrationspeedandefficiencyofcellsinducedbyC6conditionedmediumandSDF1αonstratingthechemotacticeffectofbothC6conditionedmediumandSDF1αonBMSCs.Theseresultsedbyexaminationofmigrationtracksofindividualcells.Moreover,BMSCsatdifferentstatesofdifferentiationshoforC6conditionedmediumandSDF1α

5、.CONCLUSION:ThedirectedmigrationofBMSCsiscloselyrelatedtothedifferentiationstatesofthesecells.　　[Keyigration;tropism恶性胶质瘤是目前最为盛行的脑瘤,干细胞移植极有希望治疗胶质瘤。因骨髓间充质干细胞(bonemarroesenchymalstemcells,BMSCs)体内体外均显示很强的胶质瘤趋化性[1],所以应用BMSCs治疗胶质瘤即是很好的细胞治疗手段。然而处于不同分化状态的BMSCs,尤其是成神经分化过程中的BMSCs能否改变其向胶质瘤趋化性迁移的能

6、力,还不得而知。众多研究表明,C6细胞分泌的多种细胞因子影响BMSCs的定向迁移,如SDF1α。鉴于此,本实验利用化学诱导剂联合细胞因子的诱导方法,研究成神经分化的BMSCs向C6细胞条件培养基和SDF1α的趋化性迁移。　　1材料和方法　　1.1材料倒置相差显微镜购自日本Olympus公司、CO2培养箱购自德国Heraeus公司、恒温离心机购自法国Jouan公司、35mm培养皿和细胞培养瓶购自美国Coringcostar公司。LDMEM培养基、HDMEM培养基、胎牛血清(FBS)均购自Gibco公司,小牛血清(FCS)购自Hyclone公司,Percoll淋巴细

7、胞分离液购自Pharmacia公司,胰蛋白酶(Trypsin)、EDTA、碱性成纤维生长因子(basicfibroblastgroethylsulfoxide,DMSO)、多聚赖氨酸(PLL)、FITC标记βIIITubulin抗体均购自Sigma公司,N2Supplement购自PAA公司,Hochest33258、L谷氨酰胺购自上海生工,FITC标记抗鼠CD29、CD34、CD45、CD71、CD90(mAb)、PE标记抗鼠CD106(mAb)购自Cedarlane公司,抗鼠Nestin、NSE、GFAP(mAb)均购自Chem