葛根素对大鼠局灶性缺血脑组织内海马神经元型一氧化氮合酶表达的影响

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1、葛根素对大鼠局灶性缺血脑组织内海马神经元型一氧化氮合酶表达的影响：张茹，成红学，吴海琴，王虎清，郭荷娜【摘要】目的观察葛根素对大鼠局灶性脑缺血海马神经元神经型一氧化氮合酶(nNOS)表达的影响。方法局灶性脑缺血模型由线栓法阻塞大鼠大脑中动脉制成，葛根素腹腔注射干预治疗，采用氯化三苯基四氮唑染色方法测定脑梗死体积，免疫组织化学方法测定大鼠脑缺血后不同时间点前后海马区nNOS阳性神经元表达的变化。结果2h和12h干预组脑梗死体积明显小于对照组(P<0.05)，24h干预组与对照组比较无统计学差异(P>0.05)。缺血2h组海马nNOS阳性细胞开始增加，12h组最高，24h组

2、较前有所下降;干预组大鼠海马nNOS阳性细胞数与对照组比较降低明显，有统计学差异(P<0.01)。结论nNOS参与早期脑缺血损伤，葛根素通过抑制nNOS表达对大鼠脑神经元损伤起保护作用。【关键词】大鼠;葛根素;脑缺血损伤;神经型一氧化氮合酶;海马　ABSTRACT:ObjectiveToobservetheeffectofPuerarinontheexpressionofneuronalnitricoxidesynthase(nNOS)inhippocampalneuronsafterfocalcerebralischemiainrats.MethodsThemodeloff

3、ocalcerebralischemiaiddlecerebralarteryocclusioninratsiatimegroups,including2hour,12hourand24hourischemicmodelsandthecontrol.Puerarinodels.Thevolumeofcerebralinfarctioninedbytripheyetetrazoliumchloride(TTC)staining.TheexpressionofnNOS-positiveneuronsinthehippocampusinedbyimmunohistochemistry.R

4、esultsThecerebralinfarctionvolumein2-hourand12-hourPuerarininterventiongroupsallerthanthatofthecontrol(P<0.05),butthereicmodelandthecontrol(P>0.05).ThenumberofnNOS-positivecellsinthehippocampusstartedtoincreaseinthe2-hourischemicrats,andreachedthepeakinthe12-hourischemicrats.ThenNOS-posi

5、tivecellsinthePuerarin-therapyratsdecreasedsignificantly(P<0.01)paredicbraininjury.PuerarinmayprotectthebrainneuronsfromischemicinjurybyinhibitingtheexpressionofnNOSintheneurons.　　KEYI[4]的插线方法，略加改良。应用100mL/L的水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，线栓的制作选市售标准尼龙渔线，直径规格为0.24～0.26mm，头部沾上清漆约0.5cm，使其头部略粗且光滑，晾干后酒精清洁，临用前置肝素中

6、浸泡10min。从左侧颈总动脉插入，进入长度约为18～20mm，略感阻力即停止进线，从而制造左侧大脑中动脉供血区完全性局灶性脑缺血模型。记录线栓时间，均为持续栓塞。模型成功标准：①右侧肢体疼痛回缩迟钝或消失;②提尾倒悬时右上肢向胸前屈曲;③行走时右侧倾倒或向右转圈。模型干预组及对照组均建成模型，假手术组除不插入线栓外，其余操作同上。　　1.4氯化三苯基四氮唑标本的制备与分析给药5h后，将大鼠麻醉迅速断头，剥离大脑。生理盐水冲洗片刻，-20℃速冻5min，然后弃去小脑和延髓，将脑从额极向后连续冠状切面，每2mm一张。放入10g/L氯化三苯基四氮唑(tripheyetetrazoliu

7、mchloride,TTC)中，37℃摇晃恒温孵育30min，0.1mol/L磷酸盐酸缓冲溶液冲洗2～3次。然后用40g/L多聚甲醛溶液固定24h。将固定的脑片按切片顺序排列，拍照后扫描输入计算机。用图像处理软件计算每一脑片白色区域的面积及红色区域的面积，乘以厚度(2mm)并将所得数值相加得相应的体积。　　1.5取材与制片给药5h后，以100mL/L水合氯醛3mL/kg腹腔注射麻醉大鼠，进行心内穿刺灌注固定，先用约250mL室温肝素盐水快速灌注，继之以4℃40g/L多