rhd 1227a等位基因在rh阴性人群和随机人群中的频率研究

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1、RHD1227A等位基因在Rh阴性人群和随机人群中的频率研究：吴俊杰　洪小珍　许先国马开荣朱发明严力行【摘要】　　本研究调查RHD1227A等位基因在Rh阴性人群和随机人群中的频率。采用等位基因特异-聚合酶链反应(allelespecific-polymerasechainreaction,AS-PCR)检测RHD1227A等位基因，RHD基因拷贝数采用D杂合性试验和RHD外显子9的核苷酸序列分析方法进行确定。结果表明：在143例Rh阴性献血员中，共检测到41例RHD1227A等位基因携带者，其中8例(19.51%)为RhCC

2、dee，32例(78.05%)为RhCcdee，1例(2.44%)为RhCcdEe。在这41例RHD1227A等位基因携带者中，35例有RHD基因的缺失，另外的6例是RHD1227A等位基因的纯合子。在489例随机献血员中检测到7例RHD1227A等位基因先证者，都是RHD1227G/A杂合子，且是正常Rh阳性血型。结论：RHD1227A等位基因在Rh阴性人群中的频率为16.43％，在随机人群中的频率为0.72％。【关键词】RHD基因；RHD1227A等位基因；基因频率；Rh阴性人群　　　RHD1227AAlleleFrequ

3、encyamongRhNegativePopulationandRandomPopulation　　　AbstractToinvestigatethefrequencyofRHD1227AalleleinRhnegativepopulationandrandompopulation,anAS-PCR(allelespecific-polymerasechainreaction)methodloyedtodetectRHD1227Aallele.RHDgenecopyinedbyDzygositytestandRHDexon9n

4、ucleotidesequenceanalysis.Theresultsshoong143Rhnegativedonors,forty-oneRHD1227Aallelecarriersainingcarriersozygous.Seven(1.43%)individualsong489randomdonors.TheyalRhpositivephenotype.ItisconcludedthatthefrequencyofRHD1227Aalleleis16.43％amongRhnegativepopulationand0.

5、72%amongtherandompopulation.　　Keyerasechainreaction,AS-PCR)方法调查DEL表型的主要等位基因RHD1227A在Rh阴性人群和随机人群中的频率，并对结果的临床意义作了讨论。　　材料和方法　　对象　　在2003年10月—2004年10月期间在浙江省血液中心献血的无亲缘关系Rh阴性献血员143名作为Rh阴性人群，随机选取在浙江省居住或者工作的无亲缘关系献血员489名作为随机人群。　　Rh表型血清学鉴定　　RHD表型鉴定采用常规盐水平板法，使用加拿大Dominion公司的IgM

6、和IgG混合的抗D试剂（人单克隆IgM抗D,D175-2细胞株；人单克隆IgG抗D，D4151E4细胞株）。RhC、Rhc、RhE和Rhe鉴定采用盐水试管法，试剂为Dominion公司的相应单克隆抗体。　　AS-PCR　　参照文献［10］进行。用特异扩增RHD1227A等位基因的引物：RHDEL－s（上游引物）:GACCAAGTTTTCTGGAAA（位置对应于AJ299028的68-85）、RHDEL－a（下游引物）:CGAGAGAATTTTGAGCAC（位置对应于AB035185的849-832）。一对特异扩增人生长激素（H

7、GH）基因429bp的引物作为内对照，HGH-s（上游引物）：GCCTTCCCAACCATTCCCTTA；HGH-a（下游引物）：TCACGGATTTCTGTTGTGTTT。反应总体积10μl，含模板DNA0.2μl（约含DNA20-50ng），特异性引物终浓度250nmol/L，内对照引物终浓度50nmol/L，MgCl2终浓度1.5mmol/L，dNTP终浓度200mmol/L，Taq酶0.2U（TaKaRa公司产品）。PCR扩增条件：95℃预变性5分钟，然后94℃变性30秒、58℃退火30秒和72℃延伸50秒，循环30次

8、，最后72℃延伸5分钟。产物通过2％琼脂糖电泳，用凝胶成像仪（Syngene公司产品）观察结果。　　RHD基因外显子9序列分析　　参照文献［11］进行。用RHD基因外显子9的特异引物，377测序仪进行PAGE电泳，SequenceAnalysis进行数据分析。　　RHD基因缺