rhd 1227a等位基因在rh阴性人群和随机人群中的频率研究

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1、RHD1227A等位基因在Rh阴性人群和随机人群中的频率研究吴俊杰 洪小珍 许先国马开荣朱发明严力行【摘要】  本研究调查RHD1227A等位基因在Rh阴性人群和随机人群中的频率。采用等位基因特异-聚合酶链反应(allelespecific-polymerasechainreaction,AS-PCR)检测RHD1227A等位基因,RHD基因拷贝数采用D杂合性试验和RHD外显子9的核苷酸序列分析方法进行确定。结果表明:在143例Rh阴性献血员中,共检测到41例RHD1227A等位基因携带者,其中8例(19.51%)为Rh

2、CCdee,32例(78.05%)为RhCcdee,1例(2.44%)为RhCcdEe。在这41例RHD1227A等位基因携带者中,35例有RHD基因的缺失,另外的6例是RHD1227A等位基因的纯合子。在489例随机献血员中检测到7例RHD1227A等位基因先证者,都是RHD1227G/A杂合子,且是正常Rh阳性血型。结论:RHD1227A等位基因在Rh阴性人群中的频率为16.43%,在随机人群中的频率为0.72%。【关键词】RHD基因;RHD1227A等位基因;基因频率;Rh阴性人群   RHD1227AAllele

3、FrequencyamongRhNegativePopulationandRandomPopulation   AbstractToinvestigatethefrequencyofRHD1227AalleleinRhnegativepopulationandrandompopulation,anAS-PCR(allelespecific-polymerasechainreaction)methodloyedtodetectRHD1227Aallele.RHDgenecopyinedbyDzygositytestandR

4、HDexon9nucleotidesequenceanalysis.Theresultsshoong143Rhnegativedonors,forty-oneRHD1227Aallelecarriersainingcarriersozygous.Seven(1.43%)individualsong489randomdonors.TheyalRhpositivephenotype.ItisconcludedthatthefrequencyofRHD1227Aalleleis16.43%amongRhnegativepopu

5、lationand0.72%amongtherandompopulation.  Keyerasechainreaction,AS-PCR)方法调查DEL表型的主要等位基因RHD1227A在Rh阴性人群和随机人群中的频率,并对结果的临床意义作了讨论。  材料和方法  对象  在2003年10月—2004年10月期间在浙江省血液中心献血的无亲缘关系Rh阴性献血员143名作为Rh阴性人群,随机选取在浙江省居住或者工作的无亲缘关系献血员489名作为随机人群。  Rh表型血清学鉴定  RHD表型鉴定采用常规盐水平板法,使用加拿大

6、Dominion公司的IgM和IgG混合的抗D试剂(人单克隆IgM抗D,D175-2细胞株;人单克隆IgG抗D,D4151E4细胞株)。RhC、Rhc、RhE和Rhe鉴定采用盐水试管法,试剂为Dominion公司的相应单克隆抗体。  AS-PCR  参照文献〔10〕进行。用特异扩增RHD1227A等位基因的引物:RHDEL-s(上游引物):GACCAAGTTTTCTGGAAA(位置对应于AJ299028的68-85)、RHDEL-a(下游引物):CGAGAGAATTTTGAGCAC(位置对应于AB035185的849-8

7、32)。一对特异扩增人生长激素(HGH)基因429bp的引物作为内对照,HGH-s(上游引物):GCCTTCCCAACCATTCCCTTA;HGH-a(下游引物):TCACGGATTTCTGTTGTGTTT。反应总体积10μl,含模板DNA0.2μl(约含DNA20-50ng),特异性引物终浓度250nmol/L,内对照引物终浓度50nmol/L,MgCl2终浓度1.5mmol/L,dNTP终浓度200mmol/L,Taq酶0.2U(TaKaRa公司产品)。PCR扩增条件:95℃预变性5分钟,然后94℃变性30秒、58℃

8、退火30秒和72℃延伸50秒,循环30次,最后72℃延伸5分钟。产物通过2%琼脂糖电泳,用凝胶成像仪(Syngene公司产品)观察结果。  RHD基因外显子9序列分析  参照文献〔11〕进行。用RHD基因外显子9的特异引物,377测序仪进行PAGE电泳,SequenceAnalysis进行数据分析。  RHD基因缺失

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