低浓度hbsag人群临床特征及免疫功能测定分析

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1、低浓度HBsAg人群临床特征及免疫功能测定分析：成军,孙长贵,陈瑜,许志良,王国政,孙关忠,李晓军【摘要】　　目的:分析慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者高、低浓度乙型肝炎表面抗原(HBsAg)人群血清双特异性免疫复合物(TCIC)及外周血淋巴细胞亚群之间的差异,以了解其临床特征及与宿主免疫功能。方法:采用捕捉法酶联免疫吸附试验(ELISA)和流式细胞术(FCM)分别测定44例低浓度HBsAg人群(A组)、82例高浓度HBsAg人群(B组)、22例健康体检者(C组)血清TCIC和淋巴细胞亚群,并进行分析比较

2、。结果:A组90.9%(40/44)分布于非活动期,以HBsAg/IgGCIC阳性率最高15.9%(7/44),B组以HBsAg/C3CIC阳性率最高46.3%(38/82);A组血清TCIC阳性率、(A)值及非活动期的CD3+CD8+均低于B组或相应分期(P<0.01,P<0.05),CD4+/CD8+高于B组相应分期(P<0.01)。结论:低浓度HBsAg人群机体TCIC形成和清除能力均较低下,且存在低剂量诱导的免疫耐受现象。【关键词】免疫复合物;慢性HBV感染;乙型肝炎表面抗原

3、;淋巴细胞亚群;免疫耐受　　低浓度乙型肝炎表面抗原(HBsAg)人群在感染性疾病诊断中已越来越引起临床实验室及流行病学专家的重视［1,2］,低浓度HBsAg的检测与报告给临床实验室带来了新的挑战,给临床的诊断和治疗带来了新的思考,在流行病学方面,低浓度HBsAg感染者在自然人群及慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染人群中的分布、临床特征、血清学表现模式、血清型、基因型以及宿主的免疫功能与高浓度HBsAg感染者之间存在怎样的差异都值得研究和探讨,为此我们对慢性HBV感染人群以HBsAg浓度及自然史［3］进行分组研

4、究,采用捕捉法酶联免疫吸附试验(ELISA)和流式细胞术(FCM)分别测定血清双特异性免疫复合物(TCIC,包括HBsAg/IgGCIC、HBsAg/IgACIC、HBsAg/IgMCIC、HBsAg/C3CIC)及淋巴细胞亚群(T细胞亚群、B细胞、NK细胞),以了解低浓度HBsAg人群的临床特征及宿主免疫功能。　　1材料和方法　　1.1材料随机收集日常门诊、住院患者及体检人群慢性HBV感染者血清标本共148份,其中低浓度HBsAg血清标本44份(A组,以卫生部临床检验中心提供的HBsAg定值质控

5、血清5μg/L为标准,HBsAg含量<5μg/L定义为低浓度,经ELISA筛选后AbbottAxsym免疫分析仪测定低浓度HBsAg含量<72±6.8S/N,且经中和试验确证),通过随访排除了HBV感染早期或恢复期HBsAg/抗HBs转换阶段出现的低浓度HBsAg标本,根据自然史［3］分为非活动或低/非复制期(非活动期)40例、免疫活动期2例、免疫耐受期2例;高浓度HBsAg血清标本共82份(B组,HBsAg含量>79S/N,非活动期35例、免疫活动期37例、免疫耐受期10例);另收集

6、健康体检者乙肝病毒血清学标志物(HBVM)全阴性标本22份作为对照(C组);上述所有受检者无其他类型肝炎病毒和HIV感染史,A组、C组及B组的非活动期和免疫耐受期HBV感染者无保肝、降酶、免疫调节剂和抗病毒药物应用史,B组的免疫活动期HBV感染者在治疗前采集标本或近半年内无免疫调节剂及抗病毒药物应用史;血清标本置于-20℃保存待测,EDTAK2抗凝静脉血标本在2h内测定。抗人IgG、IgA、IgM单克隆抗体(mAb)包被酶标板由北京SunBiomedicalTechnologyCo.,Ltd提供,生物素

7、化鼠抗人C3抗体包被酶标板购置美国AdlitteramDiagnosticLaboratories,Inc.,HRP抗HBs(多克隆抗体)及ELISAHBVM试剂由上海科华公司提供,淋巴细胞亚群试剂购自法国Immunotech公司,美国AbbottAxsym免疫分析仪及其HBVM配套试剂,美国BioRad550型酶标仪,美国Coulter公司EPICSXL型流式细胞仪。　　1.2方法　　1.2.1血清TCIC测定参照文献［4］进行操作,其中结果以HBVM阴性的健康体检者血清吸光度(A)值(x±2s

8、)作为cutoff值来判断阳性例数及记录阳性结果的A值(x±s)。　　1．2．2淋巴细胞亚群测定取EDTAK2抗凝外周血100μL分别加入10μLCD3FITC/CD16+56PE/CD19PC5、CD4FITC/CD8PE/CD3PECy5和同型对照抗体进行标记,经孵育、溶血、洗涤后由专业人员在流式细胞仪上进行CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD19+、CD16+56+百分率测定,CD4