改变组织醛固酮及其受体表达对shr大鼠肾脏纤维化的影响

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1、改变组织醛固酮及其受体表达对SHR大鼠肾脏纤维化的影响：成彩联，娄探奇，汤颖，石成钢，陈珠江【摘要】【目的】观察改变肾组织醛固酮及其受体水平对自发性高血压大鼠肾脏纤维化的影响。【方法】8周龄的雄性自发性高血压大鼠（SHR）24只及同源正常京都大鼠（ASSON染色，参照文献[4]进行评分，200倍光镜下，每张切片随机选择肾组织内5个肾小球，利用图像分析系统，首先检测肾小球总面积，再检测相应肾小球内胶原的总OD(光密度)值（蓝色代表胶原纤维），计算胶原纤维OD/肾小球总面积，代表胶原纤维的含量。1.2.6肾组织转化生长因子和醛固酮受体mRNA采用RT-PCR方法

2、，TRIZOL试剂购于InvitrogenLifeTechnologies公司，逆转录试剂盒购自晶美生物公司，PCR反应预混液购自宝生物工程（大连）有限公司。取总量为4?滋g的总RNA，以RandomPrimer为引物合成cDNA第一链，以cDNA为模板进行PCR反应。PCR扩增条件：GAPDH（725bp）：94℃2min，94℃30s，52℃30s，72℃45s，72℃10min，32个循环；TGF-β1（432bp）：94℃2min，94℃30s，52℃30s，72℃45s，72℃10min，32个循环；MR（486bp）：94℃2min，94℃1mi

3、n，49℃1min，72℃1min，72℃10min，35个循环。PCR产物经溴化乙锭染色的1.5%琼脂糖凝胶电泳，全自动凝胶成像和化学发光分析系统扫描照相，分析电泳带的灰度，以与内参照GAPDH的条带密度A值之比半定量表达水平。1.2.7肾组织TGFβ1和醛固酮受体蛋白采用免疫组化方法，兔抗大鼠TGF-β1单克隆抗体（使用浓度为1∶100）购自SantaCruz公司，抗兔SABC免疫组化试剂盒购自北京中山生物有限公司，山羊抗大鼠醛固酮受体多克隆抗体（使用浓度为1∶50）及抗山羊SABC免疫组化试剂盒均购自SantaCruz公司。用德国KONTRONIBAS

4、2.5全自动图象分析系统进行免疫组化结果定量分析[5]。1.3统计方法数据以均数±标准差表示，统计软件采用SPSS11.0，根据方差齐性检验结果，组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较用LSD-t检验，方差不齐资料采用Games-Howell法进行两两比较，等级资料采用秩变换分析方法进行比较，α=0.05。2.3临床指标高血压对照组大鼠自实验开始时（8周龄）已出现高血压，此后，随着周龄增大，血压逐渐升高，在观察时间为8周（16周龄）时血压已升至180mmHg左右，出现明显的蛋白尿和低白蛋白血症(P<0.05)，血尿素氮和肌酐水平与正常对照组无明显区别

5、(P>0.05)，正常对照组大鼠整个观察时间内都没有出现高血压。贝那普利干预后，血压逐渐下降，尿蛋白明显降低（P<0.05），血白蛋白水平升高（P<0.05）；大剂量安体舒通干预后，血压没有明显改变(P>0.05)，尿蛋白升高（P<0.05），血白蛋白减少（P<0.05）；血尿素氮和肌酐水平在各组间无明显区别（P>0.05），见表2。2.4病理指标与正常对照组相比，高血压对照组可以看到蛋白管型，小管扩张，管周炎症细胞浸润，肾小球内胶原形成增多（P<0.05）；贝那普利干预后，肾小球内胶原形成明显减少（P<

6、0.05）；安体舒通干预后，胶原形成明显增多（P<0.05），见图3和表3。2.5肾组织TGF-β1mRNA和蛋白的表达高血压对照组肾组织TGF-β1mRNA和蛋白的表达比正常对照组高（P<0.05），贝那普利干预后，肾组织TGF-β1mRNA和蛋白的表达较高血压对照组明显降低（P<0.05）；大剂量安体舒通干预后，肾组织TGF-β1mRNA和蛋白的表达明显升高，与高血压对照组比较有统计学差异（P<0.05），见图4、图5和表3。3讨论肾素－血管紧张素－醛固酮系统对体内体液平衡和血压调节起着主要作用，醛固酮是有丝分裂和胶原合成的强烈刺

7、激剂，可以促进心肌和肾脏纤维化[6]。醛固酮受体作为其中的一个重要环节，可能在肾脏纤维化的发生发展中起一定的作用。本实验结果发现，SHR组大鼠血压升高，尿蛋白明显增多，白蛋白明显下降，肾小球内胶原沉积增多，血管周围炎症细胞浸润、小管扩张、蛋白管型、肾脏损伤明显，肾脏的TGFβ1mRNA和蛋白表达也比正常对照组高，提示高血压可导致肾损伤和肾脏纤维化。本实验同时观察到SHR组大鼠血浆和组织的醛固酮水平及肾组织的醛固酮受体mRNA和蛋白表达均明显高于正常对照组。Delano等[7]亦观察到自发性高血压大鼠肠系膜毛细血管上醛固酮受体的密度高于正常对照组，导致对醛固酮

8、的反应升高的报道相符。由此我们设想，肾组织醛固酮及其