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时间:2018-05-01
《aiha患者外周血th1/th2、tc1/tc2亚群的研究及意义》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、AIHA患者外周血Th1/Th2、Tc1/Tc2亚群的研究及意义:吴伟全,孙炎华,邱少玲【关键词】自身免疫性溶血性贫血 [摘要]目的:研究自身免疫性溶血性贫血(autoimmunehaemolyticanaemia,AIHA)患者外周血Th1/Th2、Tc1/Tc2亚群极化状态,分析AIHA的免疫学发病机制,为AIHA的临床治疗提供新的理论依据。方法:收集AIHA患者及健康对照组外周抗凝静脉血,分离纯化T细胞。以Cy5标记的抗CD4、CD8单抗和PE标记的CD30单抗作双色流式细胞术,分析AIH
2、A患者Th/Tc、Th1/Th2、Tc1/Tc2亚群的比例变化。结果:与正常对照组相比,AIHA患者外周血CD4+细胞百分率显著降低(P<0.05),CD8+细胞百分率无明显变化(P>0.05),CD4+/CD8+比例明显降低(P<0.05),CD4+CD30-T、CD4+CD30+T细胞百分率明显下降,CD4+CD30-T/CD4+CD30+T和CD8+CD30-T/CD8+CD30+T比例均明显升高(P<0.05),而CD8+CD30-T及CD8+CD30+T细胞百分率
3、无明显变化(P>0.05)。结论:AIHA患者外周血存在细胞免疫功能失调,T细胞亚群极化状态发生改变,呈明显Th1/Tc1型细胞优势;Th1/Tc1型细胞介导的细胞免疫可能与AIHA的免疫学发病机制有关。 [关键词]自身免疫性溶血性贫血;T细胞亚群;研究 StudyonTh1/Th2、Tc1/Tc2SubsetsonPeripheralBloodofthePatientsmuneHaemolylicAnaemiaandIt'sSignificance Abstract:Object
4、iveToinvestigatethechangeofTh1likeandTh2likecellsbalanceinautoimmunehaemolyticanaemia(AIHA)patients.MethodsTheratiosofTh/Tc,Th1/Th2andTc1/Tc2inperipheralbloodTcellsmunofiuorescencestainingandbicolorfloetry(FCM)invitro.ResultsparedmunityinAIHApatientsi
5、sshiftedtoTh1typeimmunity,ayrelatetothemechanismofAIHA. Keymunehaemolyticanaemia;Tcellsubsets;Study自身免疫性溶血性贫血(autoimmunehaemolyticanaemia,AIHA)是一种器官特异性的自身免疫性疾病,其发病机制尚未完全明了。研究发现AIHA的发生发展与患者体内T细胞的极化状态有关。目前研究认为CD30可能是Th2、Tc2特异性表面标志物之一,本研究应用PE标记的抗CD30单抗和
6、Cy5标记的CD4、CD8作双色流式细胞术,检测AIHA患者及健康人群外周血T细胞各亚群的百分率。分别以CD4+CD30-T、CD4+CD30+T、CD8+CD30-T及CD8+CD30-T细胞代表Th1、Th2、Tc1及Tc2细胞,并进一步探讨Th1类/Th2类细胞极化漂移在AIHA发病机制中的作用。 1材料与方法 1.1研究对象35例AIHA患者取自本院及广东医学院附属医院血液科,男15例,女20例,年龄3岁~69岁,中位年龄45岁,均符合AIHA诊断标准,并于用药前取外周抗凝血;正常对照
7、35例为健康人群,排除AIHA及其他自身免疫性疾病,其中男16例,女19例,年龄5岁~57岁,中位年龄37岁。 1.2主要试剂和仪器AntiCD4Cy5、AntiCD8Cy5(EB公司)、AntiCD30-PE、MslgG1Cy5、MslgG1PE(Miltenyibiotec公司)、小牛血清、溶血素(0.85%NH4Cl溶液)、hCD3+TcellEnrichmentColumn、淋巴细胞分离液(AXISSHIELD公司)、EPICSXL型流式细胞仪(Beckman公司)。 1.3研究方法
8、 1.3.1外周血T细胞的分离无菌采集患者及正常人外周静脉血4ml,肝素抗凝,用淋巴细胞分离液分离得单个核细胞。无菌玻璃培养皿37℃培养30min,去除黏附于玻璃培养皿的单核细胞,以获取悬浮的淋巴细胞。加入0.85%NH4Cl溶液溶解红细胞,经T细胞分离富聚柱(hCD3+TCellEnrichmentColumn)采用负筛选法获得纯化的T淋巴细胞。用20%的小牛血清RPMI1640培养液调整细胞浓度约2×106/ml。FCM法检测其纯度大于98%,台盼蓝拒染法检测其活性大于97%。
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