aiha患者外周血th1／th2、tc1／tc2亚群的研究及意义

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1、AIHA患者外周血Th1／Th2、Tc1／Tc2亚群的研究及意义：吴伟全，孙炎华，邱少玲【关键词】自身免疫性溶血性贫血　　［摘要］目的：研究自身免疫性溶血性贫血(autoimmunehaemolyticanaemia，AIHA)患者外周血Th1／Th2、Tc1／Tc2亚群极化状态，分析AIHA的免疫学发病机制，为AIHA的临床治疗提供新的理论依据。方法：收集AIHA患者及健康对照组外周抗凝静脉血，分离纯化T细胞。以Cy5标记的抗CD4、CD8单抗和PE标记的CD30单抗作双色流式细胞术，分析AIH

2、A患者Th／Tc、Th1／Th2、Tc1／Tc2亚群的比例变化。结果：与正常对照组相比，AIHA患者外周血CD4+细胞百分率显著降低(P<0．05)，CD8+细胞百分率无明显变化(P>0．05)，CD4+/CD8+比例明显降低(P<0．05)，CD4+CD30-T、CD4+CD30+T细胞百分率明显下降，CD4+CD30-T／CD4+CD30+T和CD8+CD30-T／CD8+CD30+T比例均明显升高(P<0．05)，而CD8+CD30-T及CD8+CD30+T细胞百分率

3、无明显变化(P>0．05)。结论：AIHA患者外周血存在细胞免疫功能失调，T细胞亚群极化状态发生改变，呈明显Th1／Tc1型细胞优势；Th1／Tc1型细胞介导的细胞免疫可能与AIHA的免疫学发病机制有关。　　　　［关键词］自身免疫性溶血性贫血；T细胞亚群；研究　　StudyonTh1／Th2、Tc1／Tc2SubsetsonPeripheralBloodofthePatientsmuneHaemolylicAnaemiaandIt'sSignificance　　Abstract:Object

4、iveToinvestigatethechangeofTh1likeandTh2likecellsbalanceinautoimmunehaemolyticanaemia(AIHA)patients．MethodsTheratiosofTh／Tc，Th1／Th2andTc1／Tc2inperipheralbloodTcellsmunofiuorescencestainingandbicolorfloetry(FCM)invitro．ResultsparedmunityinAIHApatientsi

5、sshiftedtoTh1typeimmunity，ayrelatetothemechanismofAIHA．　　Keymunehaemolyticanaemia；Tcellsubsets;Study自身免疫性溶血性贫血(autoimmunehaemolyticanaemia，AIHA)是一种器官特异性的自身免疫性疾病，其发病机制尚未完全明了。研究发现AIHA的发生发展与患者体内T细胞的极化状态有关。目前研究认为CD30可能是Th2、Tc2特异性表面标志物之一，本研究应用PE标记的抗CD30单抗和

6、Cy5标记的CD4、CD8作双色流式细胞术，检测AIHA患者及健康人群外周血T细胞各亚群的百分率。分别以CD4+CD30-T、CD4+CD30+T、CD8+CD30-T及CD8+CD30-T细胞代表Th1、Th2、Tc1及Tc2细胞，并进一步探讨Th1类／Th2类细胞极化漂移在AIHA发病机制中的作用。　　1材料与方法　　1．1研究对象35例AIHA患者取自本院及广东医学院附属医院血液科，男15例，女20例，年龄3岁~69岁，中位年龄45岁，均符合AIHA诊断标准，并于用药前取外周抗凝血；正常对照

7、35例为健康人群，排除AIHA及其他自身免疫性疾病，其中男16例，女19例，年龄5岁~57岁，中位年龄37岁。　　1．2主要试剂和仪器AntiCD4Cy5、AntiCD8Cy5(EB公司)、AntiCD30-PE、MslgG1Cy5、MslgG1PE(Miltenyibiotec公司)、小牛血清、溶血素(0．85％NH4Cl溶液)、hCD3+TcellEnrichmentColumn、淋巴细胞分离液(AXISSHIELD公司)、EPICSXL型流式细胞仪(Beckman公司)。　　1．3研究方法　

8、　1．3．1外周血T细胞的分离无菌采集患者及正常人外周静脉血4ml，肝素抗凝，用淋巴细胞分离液分离得单个核细胞。无菌玻璃培养皿37℃培养30min，去除黏附于玻璃培养皿的单核细胞，以获取悬浮的淋巴细胞。加入0．85％NH4Cl溶液溶解红细胞，经T细胞分离富聚柱(hCD3+TCellEnrichmentColumn)采用负筛选法获得纯化的T淋巴细胞。用20％的小牛血清RPMI1640培养液调整细胞浓度约2×106/ml。FCM法检测其纯度大于98％，台盼蓝拒染法检测其活性大于97％。