cd80人鼠嵌合抗体对b淋巴瘤细胞株raji与daudi的生长抑制及杀伤作用

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1、CD80人鼠嵌合抗体对B淋巴瘤细胞株Raji与Daudi的生长抑制及杀伤作用：王艳茹,马泓冰,陈永井,朱华亭,刘玉华,杜阳阳,孙杰,陈明心,邱玉华【摘要】目的:研究CD80人-鼠嵌合抗体（命名为ch4E5）对天然高表达CD80分子的人恶性B淋巴瘤细胞株Raji与Daudi的生长抑制及杀伤作用。方法:采用免疫荧光及流式细胞术（FCM）分析ch4E5对Raji及Daudi细胞膜型CD80分子的识别;将ch4E5分别加入到Raji及Daudi中共培养,终浓度为10mg/L。在培养的第0、4、10

2、、16、24及48h,采用FCM检测细胞表面Fas及FasL的表达;培养至72h,MTT法检测细胞的增殖;以人外周血PBMC为效应细胞,Raji与Daudi为靶细胞,效靶比为20∶1,加入ch4E5,终浓度为10mg/L。培养至24h,MTT法分析ADCC效应。结果:ch4E5与Raji及Daudi的阳性结合率分别为98.6%和96.4%。ch4E5分别与Raji及Daudi共培养至4h,Raji细胞表面FasL的表达开始上调,16h的阳性表达率为16.8％,与人IgG1对照组1.5%比较明

3、显升高(P<0.01);Fas的表达从10h起逐渐增高,24h达高峰,阳性表达率为15.6％,与人IgG1对照组4.5%比较具有统计学意义(P<0.01)。Daudi的FasL及Fas的变化趋势与Raji一致。ch4E5分别与Raji及Daudi共培养至72h,细胞增殖的抑制率分别为34.60％和32.64％（P<0.01）;ch4E5介导PBMC对Raji及Daudi的杀伤率分别为55.61％及54.42％（P<0.01）。结论:CD80人－鼠嵌合抗体能够通过其Fab

4、段及Fc段发挥双重的抗肿瘤效应。【关键词】CD80;嵌合抗体;抑制作用;Fas;FasL;ADCC［Abstract］AIM:TostudytheinhibitoryandlethaleffectsofhumanmousechimericantibodyagainstCD80(namedch4E5)onthegrophomacelllinesDaudiandRaji.METHODS:ImmunofluorescenceandfloetryembraneCD80inRajiandDaudibyc

5、h4E5.Afterthecocultureofch4E5g/L,theexpressionofFasandFasLmunofluorescenceandfloetry,andtheblockingeffectoncellgroinedat72hbyMTTassay.MTTassayanIgG1controlgroup,itanIgG1controlgroup(P<0.01).Moreover,theexpressionofFasLandFasonDaudiilartotheseonR

6、aji,andthehighestexpressionore,ch4E5couldmediatetheADCCeffectandthemaximumkillingrateanmousechimericantibodyagainstCD80caninhibittheproliferationofBlymphomacelllinesDaudiandRajicellsthroughFabandFcsectionsinvitro.［Keyericantibody;inhibitoryaction;Fa

7、s;FasL;ADCCCD80是表达于抗原提呈细胞表面(antigenpresentingcell,APC)的重要协同刺激分子,其相应的受体是表达在T细胞表面的CD28家族分子。CD80与CD28结合转导T细胞活化所需的协同刺激信号［1］,参与T细胞的免疫应答及免疫调节［2,3］。随着研究的深入,发现CD80分子在多种B系肿瘤细胞中均异常高表达［4］,且该分子介导的信号与肿瘤细胞的恶性增殖及转移相关。运用基因工程技术制备的人－鼠嵌合抗体,一方面可发挥鼠源性抗体Fab段高亲和力结合抗原的特性;另一

8、方面,可通过人IgFc段介导抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（antibodydependentcellmediatedcytotoxicity,ADCC）［5］、补体依赖性细胞毒作用（plementdependentcytotoxicity,CDC）［6］及免疫调理作用等。本研究以天然高表达CD80分子的人恶性B淋巴瘤细胞株Raji与Daudi为分析对象,运用自行研制的CD80人－鼠嵌合抗体,观察和分析了其对Raji与Daudi细胞体外生长的抑制与杀伤效应。1材料和方法1.1材料