食管癌术前三氧化二砷对恶性b淋巴瘤细胞raji的抑制作用

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1、作者：宋小珍朱丽单保恩彭华【摘要】 目的 研究三氧化二砷对b淋巴瘤细胞raji的抑制作用和周期阻滞作用。方法 用mtt比色法检测不同浓度as2o3对raji细胞的体外增殖抑制率。用流式细胞仪检测as2o3作用72小时后raji细胞p21的表达变化和细胞周期的变化。结果 与对照组相比，各实验组细胞增殖明显下降。as2o3可使raji细胞周期阻滞于g0/g1期，并上调p21waf1/cip1的表达。结论 as2o3可使raji细胞阻滞于g0/g1期，其诱导周期阻滞的机制可能是通过上调p21waf1/cip1的表达。【关键词】 p21waf1/cip1 三氧化二砷 细

2、胞周期【abstract】objective toexploretheinhibitoryeffectandcycledefectofarsenictrioxideonhumanblymphomacells.method mttmethodwasusedtoobservethegrowthinhibitoryrateofrajicellstreatedwithdifferentdoseofas2o3 invitro.theexpressionlevelofp21andcellcyclewasmeasuredbyflowcytometryinrajicellstr

3、eatedwithdifferentdoseofas2o3 72h.resultsallthetreatedcellsshowedsignificantlydecreasedproliferationcomparedwithcontrolcellsinvitroasdetectedbymttmethod.thecellcycleofrajicellstreatedwithas2o3wasarresteding0/g1phaseandas2o3 canimprovetheexpressionofp21.conclusionas2o3canarrestthecell

4、cycleofrajicellsing0/g1phase.thepossiblemechanismmaybethroughup-regulationofp21expression.【keywords】p21waf1/cip1  arsenictrioxide  cellcycl       三氧化二砷是中药砒霜的主要成分，近年来因在治疗急性早幼粒细胞性白血病方面取得了满意疗效而引起广泛的关注。研究表明，其作用机制可能是三氧化二砷影响了肿瘤细胞周期的发展，诱导细胞发生凋亡1。本实验以raji细胞为研究对象，观察其是否能引起细胞周期阻滞及对周期相关基因表达的影响。 

5、      1 材料与方法       1.1材料 (1)细胞株:人b淋巴瘤细胞株raji由河北医科大学第四医院科研中心保存。（2）药物：三氧化二砷为sigma公司产品。（3）主要试剂：rpmi1640培养基购自美国gibco公司，胎牛血清购自杭州四季青公司，p21waf1/cip1鼠抗人单抗为北京中杉金桥生物公司产品。       1.2方法       1.2.1细胞培养 raji细胞用含10%胎牛血清、100u/ml青霉素和100u/ml链霉素的rpmi1640完全培养基，置于37℃，5%co2饱和湿度条件下培养箱中培养，每2～3d换液一次，实验选用对数生

6、长期细胞，设实验组与对照组，实验组分别用4、2、1μmol/las2o3处理细胞，未加药组为对照组。       1.2.2细胞生长抑制率的测定 采用mtt比色法进行检测。取对数生长期的细胞，调整细胞浓度为1.3×105/ml。取96孔板数个，每孔加入上述细胞悬液100μl，再分别加入as2o3的贮存液，使as2o3的终浓度分别为0、1、2、4μmol/l。每种药物浓度为一组，每组设6个平行孔，根据实验设计继续培养24、48、72h后，每孔加入10μlmtt，在相同条件下再继续培养4h后取出，离心后吸去上清夜，每孔加入100μl二甲基亚砜，振荡10～15分钟，2

7、0分钟内在酶标仪上读取波长为570nm的吸光度a值，各浓度时间点取平均值，根据下列公式计算细胞生长抑制率：细胞生长抑制率（%）=（对照组a值－实验组a值）/对照组a值×100%。       1.2.3流式细胞仪检测细胞周期变化 收集不同浓度as2o3处理的raji细胞，用pbs清洗2次再将细胞沉淀充分混匀，用70%的冷乙醇4℃固定过夜，然后离心去除固定液，pbs清洗一次，rna酶37℃处理1小时，与pi室温反应10min，用流式细胞仪测定，应用singlehistogramstatistic分析软件分析细胞周期变化。       1.2.4流式细胞仪检测p21

8、waf1/cip1蛋白的