大孔树脂分离治伤灵口服液中芍药苷的研究

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1、大孔树脂分离治伤灵口服液中芍药苷的研究【关键词】D101大孔树脂芍药苷治伤灵口服液分离治伤灵口服液是在桃红四物汤的基础上研制而成的复方制剂，主要由川芎、赤芍、桃仁、红花等十二味药材，通过水蒸汽蒸馏法提取挥发油，正交试验优化水提醇沉工艺制备而成的口服液，主要功效为活血化瘀、补肾强骨等，具有显著的降压、抗炎、扩张冠脉血管等作用。近年来大孔树脂吸附技术在中药精制工艺中的应用日益广泛，而D101大孔树脂对皂苷的吸附性能较好，故本研究旨在优化D101大孔树脂对治伤灵口服液中芍药苷的分离纯化工艺，最大限度的分离、纯化出治伤灵口服液中的芍药苷，为治伤灵口服液的含量测定提供最佳分离纯化工艺。　　1仪器和

2、材料　　1200型HPLC（美国Agilent公司）；AE200型电子天平（瑞士Mettler公司）；pHS–3C型精密pH计（上海雷磁仪器厂）；层析柱（10mm×300mm）；D101型大孔树脂（成都市科龙化工试剂厂，批号：20070118）；芍药苷标准品（中国药品生物制品检定所，批号：110736-200731）；甲醇为色谱纯；水为重蒸水；95%乙醇（药用，成都市蓉康医疗保健实业有限公司）。　　2方法与结果　　2.1芍药苷的含量测定　　2.1.1供试液的制备按处方比例称取药材，其中当归、川芎、柴胡等提取挥发油，药渣与剩余药材混合，加水8倍量，煎煮3次，每次1h，合并滤液，将其浓缩为1

3、.10～1.14g·ml-1的浸膏，放冷，加入乙醇使醇沉浓度为70%，静置48小时后滤过，滤液回收乙醇，放冷，加入炼制好的蜂蜜，混匀，再缓缓加入挥发油及0.04%对羟基苯甲酸乙酯，加水至全量，调节pH值，搅拌均匀，即得。　　2.1.2阴性对照溶液的制备按比例称取除赤芍以外的处方药材，按供试液的制备方法制备。　　2.2.3对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品10mg于100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度。　　2.2.4色谱条件［1］色谱柱：AgilentZorbaxSBC18柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相：甲醇水（35∶65），流速：1ml·min-1，检测波长：λ=230

4、nm，柱温：30℃。　　图1芍药苷色谱图（略）　　（A.标准品；B.阴性对照；C.供试品；1.芍药苷）　　Fig1HPLCchromatogramofpaeoniflorin　　(A.referencesubstance；B.negativesample；C.sample；1.paeoniflorin)　　2.2.5绘制标准曲线按上述色谱条件，分别进样对照品溶液2、4、8、10、12、16μl，记录峰面积（Y），以芍药苷的进样量(X，μg)为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y=1449.9X+8.2337，相关系数r=0.9999。结果表明，在0.2μg～1.6μ

5、g范围内芍药苷含量与峰面积成良好线性关系。图1为芍药苷的色谱图。　　2.2.6仪器精密度试验取对照品溶液10μL,按上述色谱条件连续进样6次，计算芍药苷色谱峰峰面积的RSD为0.57%。　　2.2.7稳定性试验取供试品溶液1ml于10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液10μL,分别于0，1，2，4，8，12h进样测定，计算峰面积的RSD值,芍药苷的RSD为0.766%。表明样品溶液在12h内稳定。　　　2.2.8最低检测限将芍药苷对照品溶液稀释进样,以信噪比为3∶1，芍药苷最低检测限为18.54ng。　　2.2.9回收率试验采用加样回收率方法，精密量取已知

6、含量样品共9份，定量加入芍药苷对照品，测定含量。结果见表1。　　表1加样回收率试验结果（略）　　Tab.1Therecoverytestofpaeoniflorin　　2.3大孔树脂的预处理取适量D101大孔吸附树脂，95%的乙醇充分浸泡后并用乙醇多次洗涤，直至上清液于试管中加入适量蒸馏水无白色浑浊为止，再用去离子水洗至无明显乙醇气味即可，最后转入酸碱处理，即用5%的盐酸溶液浸泡3h，然后用去离子水洗至pH值为中性，接着用5%NaOH溶液浸泡3h，然后用去离子水洗至pH值为中性即可。　　2.4吸附条件的确定　　2.4.1酸碱对芍药苷稳定性的影响分别精密量取0.2mol·L-1NaOH溶液

7、、氨试液、0.2mol·L-1HCl溶液与芍药苷标准溶液（0.1mg·ml-1）等量混合，每0.5h测定一次含量。结果，1h后，NaOH溶液和氨试液中芍药苷被降解完全，而HCl溶液中芍药苷含量为原来的99.85%，无明显变化。　　2.4.2pH对D101大孔树脂静态吸附芍药苷的影响［2］准确称取吸干表面水分的活化处理树脂8份,每份5g，分别置于50ml锥形瓶中，各加入pH值分别为3、4，5，6，7的供试液14ml，每个pH值平行操作