foxp3和gitr 在口腔扁平苔藓中的表达及意义

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1、FOXP3和GITR在口腔扁平苔藓中的表达及意义【关键词】口腔扁平苔藓;FOXP3;GITR口腔扁平苔藓(orallichenplanus，OLP)是一种常见的口腔黏膜疾病，其发病可能与精神因素、胃炎及自身免疫有关[1]。调节性T细胞(regulatoryT-cells，Treg)在维持机体免疫耐受状态，防止自身免疫疾病发生、抗移植物排斥以及肿瘤免疫中发挥重要作用[2]。叉头状转录因子3(forkheadtranscriptionfacter3，FOXP3)是特异性表达于调节性T细胞内的标志性分子。糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(glucocorticoid-inducedt

2、umornecrosisfactorreceptor，GITR)是调节性T细胞上的一个表面分子，具有许多重要的生物学活性，如参与细胞的增殖、分化和存活等。本研究采用免疫组化方法检测了FOXP3和GITR在口腔正常黏膜(normaloralmucosa，NOM)和OLP组织中的表达，探讨FOXP3和GITR在OLP发病中的作用。　　1材料与方法　　1.1研究对象　　1.1.1健康对照组15例NOM组织来自于自愿捐献者的颊黏膜，其中男6例，女9例，年龄21～57岁，均无系统性疾病，肝肾功能正常。　　1.1.2OLP患者组30例OLP组织标本来自于宁夏医科大学附属医院口腔科门诊初次就

3、诊者的未糜烂颊黏膜，均经病理诊断，其中男11例，女19例，年龄27～63岁，均未使用过激素类药物或免疫调节剂。　　1.2主要试剂兔抗人FOXP3多克隆抗体、兔抗人GITR多克隆抗体(浓缩型，北京博奥森公司)，PV9001免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒(北京中杉公司)。　　1.3方法采用免疫组织化学染色PV9001法检测FOXP3和GITR的表达强度，具体操作步骤如下：切取4μm厚切片60℃烤片过夜;脱蜡水化;抗原修复：枸橼酸缓冲液高温高压修复，自然凉至室温，PBS洗5min，3次;3%H2O2去离子水孵育10min，以阻断内源性过氧化物酶，PBS洗5min，3次;一抗孵育，4

4、℃过夜;复温20min，PBS洗5min，3次;滴加试剂1(聚合物辅助剂)，室温20min，PBS洗5min，3次;滴加试剂2(辣根酶标记抗兔IgG多聚体)，室温20min，PBS洗5min，3次;DAB显色，镜下观察结果，适时终止;复染，封片。实验均设不加一抗的阴性对照。所有实验标本均经石蜡包埋，切片，HE染色检查。　　1.4结果判定FOXP3和GITR染色的阳性信号为胞浆出现棕黄色颗粒。结合染色强度和阳性细胞数分级。选取表达最强的部位，按着色程度分级：基本未着色，染色与背景相似者为0分;着色浅、略高于背景者为1分;中度着色，明显高于背景者为2分;强染，着色深棕色为3分。视野

5、下阳性细胞数<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。二项计分相加后分为4级：0～1分为(-)，2分为(+)，3分为(++)，4分以上为(+++)，+及以上判定为阳性。　　1.5统计学方法应用统计分析软件SPSS11.5进行统计分析，等级资料采用无表达，在OLP中FOXP3和GITR高表达，见表1。FOXP3在NOM和OLP组织中表达情况经和OLP组织中表达情况经组(P<0.01)，可能是由于OLP处于不同程度的活动期和不同的临床分型，导致了FOXP3的表达增高。有文献报道FOXP3在多种肿瘤细胞中高表达，而

6、OLP又被定为可能的癌前状态，这也可能是FOXP3在OLP中过高表达的原因。　　GITR是肿瘤坏死因子受体超家族中的第18个成员，2002年发现GITR持续高水平表达于天然调节性T细胞表面，并能消除调节性T细胞的免疫抑制作用。随后的研究显示，除了调节性T细胞外，激活的CD4+CD25-T细胞、CD8+CD25+T细胞、NK细胞均表达GITR[14-15]。最近有研究报道，激活效应T细胞上的GITR后能使这些细胞抵抗CD4+CD25+调节性T细胞的作用[16]。因此可以推测，GITR既可反映体内调节性T细胞的数量及功能状况，也与效应T淋巴细胞的功能状况密切相关。本研究结果显示GI

7、TR在NOM无表达，在OLP中表达率高达96.6%，高于NOM组(P<0.01)，说明GITR的高度表达使调节性T细胞的功能受到抑制，GITR可能与OLP的发病及病变进展有关。　　FOXP3特异性的表达于调节性T细胞，GITR与调节性T细胞的功能密切相关，而FOXP3和GITR在OLP中的表达呈正相关，可能是由于FOXP3的表达增高诱发了GITR的表达，反映了机体免疫反应增强，调节性T细胞的功能降低。故认为OLP发病时GITR与FOXP3呈现高表达，二者可能参与了OLP的发病。　　[3