foxp3和gitr 在口腔扁平苔藓中的表达及意义

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1、FOXP3和GITR在口腔扁平苔藓中的表达及意义作者：臧磊漆明刘丽韩恩善李国富【摘要】目的研究FOXP3、GITR在口腔扁平苔藓(OLP)组织中的表达及其意义。方法采用免疫组化方法检测30例OLP组织和15例口腔正常黏膜(NOM)组织中FOXP3、GITR的表达。结果NOM组FOXP3和GITR均阴性表达;OLP组FOXP3和GITR表达分别较NOM增加(P<0.01);FOXP3和GITR在OLP组中的表达存在正相关关系。结论OLP患者FOXP3和GITR呈现高表达，二者可能参与了OLP的发病。【关键词】口腔扁平苔藓;FOXP3;GI

2、TR口腔扁平苔藓(orallichenplanus，OLP)是一种常见的口腔黏膜疾病，其发病可能与精神因素、胃炎及自身免疫有关[1]。调节性T细胞(regulatoryT-cells，Treg)在维持机体免疫耐受状态，防止自身免疫疾病发生、抗移植物排斥以及肿瘤免疫中发挥重要作用[2]。叉头状转录因子3(forkheadtranscriptionfacter3，FOXP3)是特异性表达于调节性T细胞内的标志性分子。糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(glucocorticoid-inducedtumornecrosisfactor10recept

3、or，GITR)是调节性T细胞上的一个表面分子，具有许多重要的生物学活性，如参与细胞的增殖、分化和存活等。本研究采用免疫组化方法检测了FOXP3和GITR在口腔正常黏膜(normaloralmucosa，NOM)和OLP组织中的表达，探讨FOXP3和GITR在OLP发病中的作用。　　1材料与方法　　1.1研究对象　　1.1.1健康对照组15例NOM组织来自于自愿捐献者的颊黏膜，其中男6例，女9例，年龄21～57岁，均无系统性疾病，肝肾功能正常。　　1.1.2OLP患者组30例OLP组织标本来自于宁夏医科大学附属医院口腔科门诊初次就诊者的未糜烂

4、颊黏膜，均经病理诊断，其中男11例，女19例，年龄27～63岁，均未使用过激素类药物或免疫调节剂。　　1.2主要试剂兔抗人FOXP3多克隆抗体、兔抗人GITR多克隆抗体(浓缩型，北京博奥森公司)，PV9001免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒(北京中杉公司)。　　1.3方法采用免疫组织化学染色PV9001法检测FOXP3和GITR的表达强度，具体操作步骤如下：切取4μm厚切片60℃10烤片过夜;脱蜡水化;抗原修复：枸橼酸缓冲液高温高压修复，自然凉至室温，PBS洗5min，3次;3%H2O2去离子水孵育10min，以阻断内源性过氧化物酶，PBS洗

5、5min，3次;一抗孵育，4℃过夜;复温20min，PBS洗5min，3次;滴加试剂1(聚合物辅助剂)，室温20min，PBS洗5min，3次;滴加试剂2(辣根酶标记抗兔IgG多聚体)，室温20min，PBS洗5min，3次;DAB显色，镜下观察结果，适时终止;复染，封片。实验均设不加一抗的阴性对照。所有实验标本均经石蜡包埋，切片，HE染色检查。　　1.4结果判定FOXP3和GITR染色的阳性信号为胞浆出现棕黄色颗粒。结合染色强度和阳性细胞数分级。选取表达最强的部位，按着色程度分级：基本未着色，染色与背景相似者为0分;着色浅、略高于背景者为1

6、分;中度着色，明显高于背景者为2分;强染，着色深棕色为3分。视野下阳性细胞数<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。二项计分相加后分为4级：0～1分为(-)，2分为(+)，3分为(++)，4分以上为(+++)，+及以上判定为阳性。　　1.5统计学方法应用统计分析软件SPSS11.5进行统计分析，等级资料采用Wilcoxon秩和检验，相关分析采用Spearman相关分析法。10　　2结果　　2.1FOXP3、GITR在口腔正常黏膜和口腔扁平苔藓组织中的表达情况　　FOXP3免疫组

7、化染色结果(图1，见插页4)，GITR免疫组化染色结果(图2，见插页4)。结果显示FOXP3和GITR在NOM无表达，在OLP中FOXP3和GITR高表达，见表1。FOXP3在NOM和OLP组织中表达情况经Wilcoxon秩和检验，Z=-4.464，P<0.01，差异有统计学意义;GITR在NOM和OLP组织中表达情况经Wilcoxon秩和检验，Z=-5.509，P<0.01，差异有统计学意义。　　2.2GITR和FOXP3表达程度的相关性　　FOXP3的表达与GITR表达呈明显正相关，r=0.537，P<0.01，见表2，

8、即二者在OLP中的表达水平有同时增强或减弱的趋势。表1FOXP3、GITR在口腔正常黏膜和扁平苔藓组织中的表达(例数)　　3讨论10　　OLP是一种常见的口腔黏膜疾