tnfα在妊娠期糖尿病外周血单个核细胞和胎盘组织中的表达研究

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1、TNFα在妊娠期糖尿病外周血单个核细胞和胎盘组织中的表达研究【关键词】妊娠期糖尿病肿瘤坏死因子胰岛素抵抗【Abstract】ObjectiveTostudytherelationshipbettumornecrosisfactoralpha(TNFα)concentrationsandinsulinresistance;ThendetecttheexpressionlevelsofTNFαmRNAinperipheralbloodmononuclearcellsandplacentaltissueofpatientsellitus(GD

2、M).MethodsSerumTNFαconcentrationseasuredbyELISA.TheexpressionlevelsofTNFαmRNAinperipheralbloodmononuclearcellsandplacentaltissueofpatientsinedbyRealtimeRTPCR.ResultsTheconcentrationsofserumTNFαinGDMgrouparemarkedlyhigherthanthatinnormalglucosetolerance(NGT)group.Theexp

3、ressionlevelsofTNFαmRNAinplacentaltissueofGDMgroupononuclearcellsofbothgroup.ConclusionTheconcentrationsofserumTNFαightoriginatefromplacentaltissueandcontributetothepathogenesisofgestationaldiabetiesmellitus.【Keyellitus；tumornecrosisfactor；insulinresistance　　妊娠期糖尿病（gestat

4、ionaldiabetesmellitus,GDM）发病率呈逐年上升的趋势，严重危害了妊娠母婴的健康［1］。研究表明，孕妇体内胎盘激素和脂肪细胞因子（adipocytokines）的浓度改变所造成的胰岛素抵抗（IR）是引起GDM的主要原因，遗传因素在其中发挥了重要作用。肿瘤坏死因子α（TNFα）作为一种重要的脂肪细胞因子，目前已成为GDM发病机制研究的热点之一［2］。本文应用ELISA法和RealtimeRTPCR法分别对晚孕GDM母体外周血中TNFα浓度、母体外周血单个核细胞(PBMC)和胎盘组织中TNFαmRNA的含量进行了检测

5、和分析，以期为探讨TNFα与胰岛素抵抗的关系，及其在GDM发病中的作用提供实验依据。　　资料和方法　　1.研究对象　　选取2008年4月至2009年1月在我院定期产检并住院分娩的孕妇，于孕24～28周行50g糖筛查，服糖后1h血糖≥7.8mmol/L者行75gOGTT试验，参照乐杰《妇产科学》第6版GDM诊断标准。随机选取28例GDM孕妇为病例组（GDM组），20例正常孕妇为对照组（正常糖耐量组，NGT组）。GDM组平均年龄29.31±2.32岁，平均孕周273.20±6.31天，平均体重指数（BMI）27.52±2.91kg/m2；NGT

6、组平均年龄29.27±1.85岁，平均孕周275.44±3.53天，平均体重指数（BMI）25.24±2.76kg/m2。两组对象均排除全身急、慢性感染等已知能够导致TNFα升高的因素，年龄、孕周及体重指数（BMI）差异结果均无统计学意义(P＞0.05)。　　2.仪器与试剂　　主要仪器与试剂如下：ABI7500荧光PCR扩增仪、BACKMAN超速冷冻离心机、BIORAD680酶标仪、淋巴细胞分离液Ficoll(上海华康生物技术发展中心)、TRIZOLmRNA提取试剂盒（INVITROGN公司）、TRKARARTPCR试剂盒（宝生物工程（

7、大连）公司）、TNFαELISA试剂盒（晶美生物工程有限公司）。　　3.ELISA法测定血清中TNFα浓度　　所有研究对象空腹8～12h后，于次日晨抽取肘静脉血3ml，1h内分离血清，置-20℃保存，取0.5ml用于ELISA法检测TNFα浓度，剩余血清用于测定FBG、FINS等相关生化指标。　　4.RealtimeRTPCR检测TNFαmRNA　　①PBMC的分离：静脉血5ml肝素抗凝，加入淋巴细胞分离液，2000rpm离心20min，吸取单个核细胞层，PBS液洗涤，取细胞沉淀置-80℃备用。②胎盘的采集：胎盘娩出后，立即无菌取

8、母体面中央约1.0×1.0×1.0cm3的胎盘组织（避开梗塞及钙化灶），冰生理盐水冲洗，吸去水份，分别用锡箔纸包好标记，立即置于液氮罐中10～15min，取出置-8