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1、探究小儿咽扁颗粒含量测定方法1介绍 小儿咽扁颗粒为中药复方制剂,其主要成分为金银花、射干、桔梗、人工牛黄、麦冬等,功能：清热利咽,解毒止痛。用于肺实热引起的咽喉肿痛,咳嗽痰盛,咽炎喉炎等。其中金银花为清热解毒、治疗喉痹的主要药物。金银花主要成分为绿原酸(花中可达5%),控制其含量十分重要。绿原酸具有抗氧化、抗菌抗病毒、治疗心血管疾以及抗癌变、免疫调节等作用。通过对不同检测波长、流动相、提取时间、提取溶剂、提取方法、溶剂用量的试验以及各种方法的结果准确度、精密度、稳定性和重现性的考察,确定了高效液相方法测
2、定绿原酸含量的可行性,并选择出最佳测定方法。1 试验材料 试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈-0.4%磷酸溶液(12：88)为流动相,柱温30℃,流速1.0ml/min,检测波长为385nm。理论板数按绿原酸峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品适量,加甲醇制成每1ml含0.084mg的溶液。供试品溶液的制备：精密取本品1g,置具塞锥形瓶中,精密加50%甲醇50ml,称重,超声处理20min后,放冷至室温,再次称重,用50%甲醇补充减失的重量,摇匀,用0.45μm
3、微孔滤膜滤过,即得 2试验方法及结果 2.1检测波长的选择取绿原酸对照品适量,用甲醇溶解并稀释成每1ml含0.084mg/ml的溶液,在190nm~400nm的波长范围内扫描,本品在327.8nm处有最大吸收,与中国药典金银花(含量测定)项下测定波长(327nm)相近,为保持一致,故选择327nm作为本品的检测波长[1]。 2.2流动相的选择流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液(12：88);柱温：30℃;流速：1ml/min;在此条件下绿原酸与其他组分均达到基线分离,而且峰形较好。 试验中曾用以下流动
4、相进行试验：乙腈-0.4%磷酸溶液(13：87)(药典金银花《含量测定》项下流动相),但绿原酸与相邻峰尚未达到基线分离。 2.3供试品溶液的制备 2.3.1提取时间的考察精密称取本品1.000g(3份),分别加入甲醇50ml,称重,分别超声处理20、30、50min,放冷,用甲醇补充减失的量,摇匀,滤过,即得。吸取上述供试品溶液10μl按拟定的条件测定。 2.3.2提取方法的选择精密称取本品2份：①精密加入甲醇50ml,称重,分别超声提取50min,放冷,称重,用甲醇补充减失的量,摇匀,滤过,
5、即得。②精密加入甲醇50ml,称重,回流提取50min,放冷,称重,用甲醇补充减失的量,摇匀,滤过,即得。吸取上述各供试品溶液10μl按拟定的条件测定,结果表明,超声20min提取效果较好。 2.3.3提取溶剂的选择精密称取本品1.0000g2份：分别加入下表不同溶剂50ml,超声处理20min,放冷。分别用不同溶剂补充减失的量,摇匀,滤过,即得。吸取上述各供试品溶液10μl按拟定的条件测定,结果表明,50%甲醇提取效果较好。 2.3.4溶剂用量的考察精密称取1.0000g3份：精密加入5
6、0%甲醇30ml、50ml、60ml,称重,超声处理20min,放冷,称重,用50%甲醇补充减失的量,摇匀,滤过,即得。吸取上述各供试品溶液10μl按拟定的条件测定,结果表明,50ml与60ml提取效果差异较小。依据以上测定结果,综合考虑提取效果,最终选择50%甲醇50ml超声处理20min作为本品的处理方法。 2.4阴性溶液的制备依据上述色谱条件分别吸取供试品溶液、50%的甲醇溶液、对照品溶液各10μl进行测定,供试品溶液和对照品溶液在相同的保留时间各有一个色谱峰,而50%的甲醇溶液在此保
7、留时间无色谱峰[2]。 2.5线性关系考察精密吸取对照品溶液(0.084mg/ml)1μl、3μl、6μl、8μl、14μl按已拟定的色谱条件测定峰面积,以峰面积积分值为纵坐标,绿原酸的量(μg)为横坐标绘制标准曲线,计算得回归方程：y=59.040x-3.8625,r=0.9999。实验表明,绿原酸在0.084~1.176μg范围内呈良好的线性关系。 2.6精密度取绿原酸对照品溶液,连续进样5次,每次6μl,记录色谱图。结果表明,仪器的精密度良好。
8、2.7稳定性试验取同一份供试品溶液10μl,分别在0、2、4、6、8h进样一次,考察样品溶液的稳定性,计算相对标准偏差,结果表明,供试品溶液在8h内基本稳定。 2.8重现性实验精密称取样品(20071118)五份,制成供试品溶液,按拟定的色谱条件测定峰面积,并计算含量,计算相对标准偏差<5%,结果表明,本方法的重现性良好。 2.9加样回收率取已知含量的小儿咽扁颗粒(20071118)五份,分别添加绿原酸对照品适
