观察zc3h12d在急性肺损伤大鼠肺中的表达情况

《观察zc3h12d在急性肺损伤大鼠肺中的表达情况》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、观察Zc3h12d在急性肺损伤大鼠肺中的表达情况　　小肠缺血再灌注损伤(smallintestinalischemia-reperfusioninjury，IIＲI)是一种临床常见的病理现象，常危及生命。肠系膜上动脉(superiormesentericartery，SMA)阻塞或失血性休克等许多损伤因素都能导致小肠缺血再灌注损伤的发生。小肠缺血再灌注可导致严重的局部创伤并引起多器官功能障碍，常可累及到肺组织，而且有研究显示继发的急性肺损伤(acutelunginjury，ALI)或/和急性呼吸窘迫综合征(acuterespiratorydistresssyndrome，AＲDS)是造

2、成小肠缺血再灌注损伤病人死亡的主要原因。因此，为找到新的防治措施，降低小肠缺血再灌注损伤患者的死亡率，进行小肠缺血再灌注肺损伤分子机制的研究是非常关键和必要的。　　具有CCCH锌指结构域的蛋白12D(zincfingerCCCHtypecontaining12d，Zc3h12d)，也称为TFL或P34，是近期发现的包含单个锌指结构域蛋白家族中的一员，拥有相对分子质量(Mr)58000和36000两种剪接体，在炎症因子或脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)刺激单核细胞时其表达量会发生变化，从而对细胞的生理和病理过程产生影响。然而Zc3h12d在动物肺损伤中的表达尚未见报

3、道。本实验通过建立大鼠IIＲ肺损伤模型，初步观察Zc3h12d在急性肺损伤大鼠肺中的表达情况并探讨其可能的作用及意义，为进一步了解IIＲ肺损伤发生、发展的分子机制奠定基础。　　1材料和方法　　1．1材料纯化LPS、兔抗大鼠β-actin抗体、辣根过氧化酶标记的兔抗山羊IgG、辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG购自Sigma公司;山羊抗大鼠Zc3h12d抗体购自SantaCruz公司;大鼠TNF-α、IL-1βELISA试剂盒购自北京鼎国生物技术公司;两步法免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司;TＲIzol试剂盒、逆转录试剂盒及实时定量PCＲ(re

4、altimequantitativePCＲ，qＲT-PCＲ)试剂盒购自大连TaKaＲa公司;SDS细胞裂解液、ECL显色液购自西安晶彩生物技术公司;BCA蛋白定量试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司。电热恒温干燥箱为北京科伟永兴仪器有限公司产品，荧光显微镜为徕卡公司产品，紫外分光光度计为Beckman公司产品，实时定量PCＲ仪、A)并钝性分离;对照组大鼠缝合切口，3个缺血再灌注组以无创伤动脉夹夹闭SMA起始部，缺血60min后恢复再灌注，分别再灌注30min、60min和120min;过量戊巴比妥纳腹腔注射，麻醉处死。　　1．2．2肺组织湿质量/干质量(SF，于冰上充分匀浆;4℃、12

5、000r/min离心20min，取上清，BCA法蛋白定量;加上样缓冲液煮沸5min，保存于－70℃。每孔上样蛋白浓度为40μg进行SDS-PAGE，电泳后转移到NC膜上。　　滴加50g/L脱脂牛奶50mL封闭1h，使用山羊抗大鼠Zc3h12d抗体及辣根过氧化物酶标记的兔抗山羊IgG孵育目的蛋白，以观察Zc3h12d蛋白两种剪接体的表达情况，用兔抗大鼠β-actin抗体及山羊抗兔IgG孵育内参照β-actin蛋白。ECL显色，凝胶成像系统观察并照相。　　1．2．8统计学分析实验数据录入SPSS16．0统计软件进行统计分析。各组数据以x±s表示，组间

6、比较采用单因素方差分析(One-in组比值开始增大(F=6．56，P＜0．05)，表明肺微血管通透性开始增加，肺水肿形成，IＲ60min组比值大于对照组(F=3．19，P＜0．05)，IＲ120min组比值增幅较IＲ60min减小但仍大于对照组(F=1．66，P＜0．05)，表明在IＲ60min组和IＲ120min组大鼠仍有肺水肿(图1)。　　　2．2血清和肺组织匀浆中TNF-α和IL-1β的变化ELISA检测结果显示IＲ致伤后，IＲ30min组大鼠血清和肺匀浆中TNF-α浓度较对照组升高(F=43．91，P＜0．05;F=41．44，P＜0．05)，

7、同时肺匀浆中IL-1β浓度也较对照组升高(F=9．80，P＜0．05)。IＲ60min组较IＲ30min组血清和肺匀浆中TNFα浓度升高(F=28．81，P＜0．05;F=20．30，P＜0．05)，血清中IL-1β浓度也升高(F=8．89，P＜0．05)。IＲ120min组较IＲ60min组血清和肺匀浆中TNF-α浓度升高(F=28．95，P＜0．05;F=10．23，P＜0．05)，同时血清中IL