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《电针百会、神庭穴对缺血再灌注大鼠学习记忆的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、电针百会、神庭穴对缺血再灌注大鼠学习记忆的影响 研究[1-3]表明针刺百会、神庭对改善脑卒中后认知功能障碍(poststrokecognitiveimpairment,PSCI)有效.为探讨针刺治疗PSCI的机制,我们用Morris水迷宫系统和TUNEL检测法观察电针百会、神庭穴对缺血再灌注大鼠学习记忆行为的影响. 1材料与方法 1.1实验动物雄性健康成年清洁级SD大鼠30只,体质量(275±25)g,福建中医药大学动物实验中心提供,许可证号:SYXK(闽)2005-004. 1.2材料28号0.5寸华佗牌不锈钢毫针、华佗牌
2、SDZ-Ⅱ电针仪(北京瑞康众成科技有限公司);Morris水迷宫(中国医学科学院药物研究所);TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(碧云天生物技术研究所). 1.3大鼠分组随机分为3组:假手术组、模型组、电针组,每组各10只. 1.4模型制备手术组行左侧大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)手术,制备脑缺血再灌注动物模型. 具体方法:10%水合氯醛(3ml/kg)腹腔麻醉成功后,在无菌状态下,切开颈部皮肤,钝性分离左侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)、颈内动脉(I-CA),结扎ECA及CCA近心端,远心端穿线备用. 在CCA近分叉处剪一小口,插入鱼
3、线进入颈内动脉,至感觉有少许阻力(ECA与ICA分叉处约18~22mm).然后固定好鱼线,尾端留在皮肤外以备抽线,顺序缝合好肌肉皮肤,2h后抽线实现再灌注.实验过程和动物苏醒期间,注意保温.假手术组只分离动脉,不结扎、插线.动物苏醒后通过Longa法进行神经行为学评分,以判断造模是否成功,不合格的大鼠剔除.以大鼠清醒后爬行时右转圈、提尾时右前肢内收屈曲为入选标准. 1.5干预措施电针组取神庭、百会,穴位定位参考《实验针灸学》[4].应用SDZ-II电针仪,电压6V,以针体轻轻抖动为度,疏密波,频率1~20Hz,每次30min,每日1次.手术后2
4、4h开始治疗,共14d.模型组与假手术组于手术后回笼饲养,只给予同等条件抓取,不做任何治疗. 1.6大鼠行为学观察1.6.1神经功能评分造模2h按Longa法进行神经功能缺损评分.0分:无神经损伤症状;1分:不能完全伸展对侧前爪;2分:外侧(右)转圈;3分:向对侧倾倒;4分:不能自发行走,意识丧失.分值越高,损伤越严重.造模后24h评分,以判断造模是否成功.电针干预后,用于评价电针干预效果. 1.6.2Morris水迷宫实验水迷宫的水池为120cm50cm30cm,水温(26±2)℃.池壁上4个等距离点将水池分为4个象限,池壁外
5、标4个入水点,任选1个象限在其中央放置平台,大小为6cm28cm,平台没于水面下2cm,水池周围参照物保持不变.2组大鼠在电针干预后第7天进行训练,第8天正式开始,持续进行6d.Morris水迷宫包括定位航行实验和空间探索实验2个部分. 将受试大鼠按顺时针方向依次由东北、东南、西南、西北4个象限入水点顺序面向池壁放入水中. 如果大鼠在90s内爬上平台,并停留3s以上,则认为大鼠找到平台,此为逃避潜伏期.如果90s大鼠未能找到平台,则拖拽其尾部,将其引导到平台,熟悉10s,此时潜伏期按90s计算.每次训练间隔为5min,计算每一时段4个方向潜伏
6、期的平均数及搜索平台所经过的路程.历时6d,每日1次.空间探索试验测试大鼠学会寻找平台后,对平台空间位置记忆的能力.定位航行试验结束后撤出平台,然后任选一相同入水点将大鼠放入水中,测其90s内大鼠穿过原平台区域的次数. 1.7大鼠脑组织细胞凋亡TUNEL检测制作石蜡切片,用二甲苯脱蜡,梯度乙醇水化,0.85%NaCl浸洗,浸入4%多聚甲醛固定15min,PBS浸洗,在每片载玻片上加100μL的20μg/mL蛋白酶K覆盖组织切片.室温孵育10min,PBS浸洗5min,组织切片洗涤后固定,将样本PBS浸洗,室温放置5min,取出后加1
7、00μL平衡液放置10min平衡,加100μLTUNEL反应混合液在标本上,加盖玻片或封口膜在暗湿盒中反应37℃孵育60min,浸入2SSC缓冲液中,室温放置15min终止反应,PBS浸洗5min重复3次,加入50μLDAPⅠ,避光室温下10min,浸入去离子水中,室温放置5min,重复3次,用玻璃盖玻片及抗荧光淬灭剂封片,并晾干,立即在激光共聚焦显微镜下分析样片,用标准的荧光过滤装置在530nm处观察绿色荧光,在460nm处观察蓝色的DAPⅠ. 1.8统计学处理数据用x±s和中位数表示,采用SPSS17.0统计
8、分析软件处理,组间比较用t检验、单因素方差分析、LSD法检验,不符合正态分布的用秩和检验,P<0.05为差异具有统计学意义. 2
