改良carazzi苏木精染色在冷冻切片染色中的运用

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1、改良Carazzi苏木精染色在冷冻切片染色中的运用　　在快速病理诊断的过程中，冷冻切片制备的质量和速度决定了诊断的准确性和及时性，这就要求病理技术人员掌握熟练的切片技术及快速良好的染色方法。为了做到在更短的时间内染出优质的切片，我们改进了Carazzi苏木精染液，将整个冷冻切片染色时间从7～8min缩短为3～4min［1］，以下加以介绍。　　1材料与方法　　1.1材料选取大理学院昆明附属医院2013-062014-03间术中快速冷冻组织标本700余例，分别为子宫肌瘤、甲状腺、乳腺、肺等组织，未固定新鲜取材，大小1.5cm1cm

2、0.4cm，CＲYOTOMEFE冷冻切片机切片，甲醇-冰醋酸固定，改良Carazzi苏木精及1%水溶性伊红染色。　　1.2方法　　1.2.1染液配制①2g无水苏木精溶于10ml无水乙醇，加甘油至100ml，充分混合;②23.01g硫酸铝钾溶解在390ml蒸馏水中;③0.2g碘酸钠溶解在10ml蒸馏水中;然后将①、②液充分混合后加入③液中，充分混匀后放置片刻即可使用。　　1.2.2染色流程①组织切片4～8μm厚，贴附于已编号的载玻片上;②立即于甲醇-冰醋酸中固定30～40s，流水稍洗;③改良Carazzi苏木精染色50s～

3、1min;④流水稍洗;⑤1%碳酸锂15s;⑥流水稍洗;⑦1%水溶性伊红染15s;⑧流水稍洗;⑨梯度乙醇脱水、二甲苯透明及中性树胶封固;⑩贴附标签。　　2结果　　细胞核蓝色，细胞质、甲状腺胶质、胶原纤维、红细胞等呈不同深浅的红色。细胞核内染色质细致、清晰，核浆分明(图1～4)。　　3讨论　　Carazzi及改良Carazzi苏木精染色均属于进行性染色［2］。为了能够使细胞核更快速的着色而又无需加热苏木精，故在原法的基础上苏木精的量增加了1倍［3］，改良后细胞核染色时间常温下只需50s～1min即可良好着色，室温降低时可适当延长染

4、色时间或加温染色，并且无需盐酸-乙醇分化，从而缩短了染色时间。为了快速完全溶解苏木精，改用少许无水乙醇进行溶解。苏木精加入无水乙醇后放入热水浴箱内加热溶解(不可直接酒精灯加热溶解)，再加甘油。　　改良方法中使用无水乙醇还有一定的抑制真菌生长的作用，甘油则可防止苏木精染液过度氧化，减少挥发。氧化剂将原法中的碘酸钾改为碘酸钠，主要是碘酸钠在常温下易溶于水，无需加热，稳定性好。染液中碘酸钠的量是苏木精氧化所需量的一半，作用是先使一部分苏木精氧化成苏木红，另一部分未氧化的苏木精在染色过程中慢慢氧化为苏木红，延长染液的使用时间［4］。　

5、　在配制各类型苏木精染液中媒染剂最常用的是二价或三价的金属盐(如硫酸铝钾)，但用量都不相同，甚至相差很大。理论上，苏木精被氧化成酸性染料苏木红后，仍不具有染色力，需与媒染剂结合，形成带正电荷的蓝色色淀才能与细胞核结合而完成染色。原法中25g硫酸铝钾在400ml蒸馏水中需加热才能完全溶解［2］，但随着时间推移和/或温度降低会有结晶析出及沉淀产生。有学者认为，Carazzi苏木精染液中媒染剂用量已经超出1g苏木精所结合的量［5］，其作用的只是铝离子，铝离子易水解成胶状氢氧化铝，过量时染液中常出现沉淀。本文对改良苏木精染液中使用了全

6、量媒染剂及改良媒染剂进行对比染色，染色效果基本一致，所以将其调整至硫酸铝钾在水中溶解的饱和度［5］，这样既可节省硫酸铝钾的用量且无需加热就能溶解，气温下降和染液时间推移均不会析出结晶及沉淀。　　改良Carazzi苏木精染液与Carazzi苏木精染液、Harris苏木精染液、Gill苏木精染液及Lillie-Mayer苏木精染液在冷冻切片染色效果中对比，改良苏木精染液着色只需要50～60s，染色时间较短、细胞核内染色质更加细致、清晰，而实验中Gill苏木精染液需要3～5min，余3种苏木精染液着色也需＞2min。　　本改良法有以

7、下优点:①在冷冻切片中对细胞核着色快且无需加热、分化，有助于提高染色强度;②氧化膜出现的速度比较慢;③不出现结晶及沉淀;④配制简单、省时，减少了在染液配制过程中的复杂性，还有无需加热、安全可靠、即配即用等优点。