一起金黄色葡萄球菌食物中毒检测与分析

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1、一起金黄色葡萄球菌食物中毒检测与分脯ame伍正明宁波市疾病预防控制中心宁海县疾病预防控制中心宁海县食品监督管理局目的查明食物中毒致病菌，分析菌株间的亲缘关系与毒力，为食物中毒诊断提供依据。方法致病菌分离采用国家标准和文献方法;金黄色葡萄球菌鉴定采用仪器法；同源性分析采用脉冲肠凝胶电泳法;肠毒素检测采用PCR法;药敏试验采用VITEK2Compact法。结果从22份标本屮检出12株金黄色葡萄球菌，阳性检出率为54.55%;检出SEa、SEb、SEd、SEe传统肠毒素基因4种和SEh、SEj新型肠毒素基因2种;食品株与患者株金黄色葡萄球菌的脉冲肠凝胶电泳带型一致，具有高度同源性;菌株对大

2、多数常用抗牛.素敏感。结论木起食物中毒由金黄色葡萄球菌及其肠毒素污染鸡肉卷所致;菌株携带多种肠毒素基因，致病性较强;鸡肉卷与患者检出的金黄色葡萄球菌脉冲肠凝胶电泳显示其来源为同一克隆群，从分子生物学上证明了食物中毒病原菌的相关性。关键词：金黄色葡萄球菌;食物中毒;分离鉴定;肠毒素基因;药敏;脉冲肠凝胶电泳同源性分析；为求证中毒原因，尽快查明中毒菌株的产毒能力与同源性，对分离到的SA进行鉴定、肠毒素检测、脉冲场凝胶电泳分型（Plusefieldgelelectrophoresis,PFGE）和耐药性检测，为本起食物中毒的诊断提供依据。1资料与方法1.1资料采集宁海县某职高食物中毒患者粪

3、便标本12份，呕吐物标本9份，剩余可疑食物（鸡肉卷）标木1份，共计22份标木。1.2仪器与试剂VTTRK2Coi叩act和ATB自动细菌鉴定仪为法国梅里埃公司产品;PCR荧光分析仪为美国ABI公司产品;C11EFMAPPER脉冲场凝胶电泳仪和VenaDoc凝胶成像分析系统为美国Bio-Rad公司产品。7.5%NaCl肉汤（批号：140608）、缓冲蛋白胨水（BP）（批号：140211）;三糖铁琼脂（批号140716）;SC增菌液（批号.•20140706）;营养琼脂（批号:20140915）;SS（批号:20140312）;金黄色葡萄球蘭（批号:P000257）和沙门菌显色平板（批号

4、:P000100）由郑州博赛生物技术股份有限公司生产;AH20E生化鉴定条由法国梅里埃公司生产（批号：1004769-960）:低熔点琼脂糖（批号:20140922）、PFGE级琼脂糖为Bio-Rad公司产品（批号:AG5626）,蛋白酶K为MERCK公司产（批号：140216）;ASTGP-67药敏卡为法国梅里埃公司产品（批号:20141206），均在效期内使用;沙门菌多价诊断血清由兰州生物制品研宄所有限责任公司生产（批号:20140101）;沙门菌单价诊断血清由DenMark生产（批号:20140519）。1.3方法1.3.1检测项目根据患者中毒的临床症状，对患者和食品标木进行S

5、A、沙门菌、志贺菌、变形杆菌、致泻大肠埃希菌等检测。1.3.2细菌分离鉴定鸡肉卷等食品标本参考GB4789—2010方法检测[2-5];粪便与呕吐物标本参照文献方法直接分离于显色培养基、血平板、SS平板等，（36±1）°C培养24h;同时接种SC增菌液、GN增菌液、肠道增菌液和7.5%NaCl肉汤等，（36±1）°C培养24h后分离于上述平板。可疑菌落作革兰染色镜检、生化鉴定及血清凝集试验。1.3.3PFGE分型参照美国疾病控制中心(CDOPulseNetUSA方法，分子量标记沙门菌(参考菌株H9812)由浙江省疾病预防控制中心微生物室惠赠。12株SA经DNA提取、制胶、Xbal酶切

6、、脉冲场电泳、染色与读胶。1.3.4药敏试验采用ABTGP-67卡法，结果判定按照CLSI抗菌药物敏感性试验执行标准Hl。质控菌株大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC-25923、铜绿假单胞菌ATCC27853,由浙江省疾病预防控制中心微生物室惠赠。1.3.5肠毒素引物设计与合成根据Johnson等设计合成SA传统肠毒素SEa、SEb、SEc、SEd和SEe基因的PCR扩增引物［8］，扩增产物大小分别为218bp、478bp、257bp、317bp、170bp;按Jacek等设计合成SA新型肠毒素SEg、SEh、SEi和SEj基因的PCR扩增引物［9］，扩增产物大小分

7、别为287bp、213bp、454bp、142bp。1.4统计学处理采用统计软件SPSS18.0和Excel2003进行数据统计分析，采用x检验、相对危险度(0R)，检验水准为a=0.05,以P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1发病情况2.1.1起病经过3月2日为学校新学期报到日，上午11时左右70余名学生去学校的小卖部购买鸡肉卷等食物作中餐。首发患荞出现在中午12时左右，症状为恶心、呕吐、腹痛、腹泻、头晕、头痛等。患者先到校医.室就诊，给以输液治