葡萄的组织培养快繁技术

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1、http://www.paper.edu.cn葡萄的组织培养快繁技术赵晶，张洁，周英，章芳玫，张丽娟，张秀琼甘肃农业大学生命科学技术学院（730070）E-mail：zhaojing610@126.com摘要：植物组织培养，是根据植物具有全能性的理论，利用植物体离体的器官、组织或细胞，如根、茎、叶、花、果实、种子、胚、胚珠、子房、花药、花粉以及贮藏器官的薄壁组织、维管束组织等，在无菌合适的人工培养基及光照、温度等条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株。目前，我国果树无病毒苗木迅速向产业化方向发展，葡萄组培也成为实际

2、应用最多、最有成效和最成熟的一项生物技术。关键字：愈伤组织，原生质体，脱毒苗，培养基1.葡萄脱毒组培快繁技术的研究与应用1.1葡萄试管快繁研究简史1944年，morel就开始了葡萄愈伤组织的培养。1955年Fallot、1959年Pelet等培养葡萄的茎生成不定根。1961年Galzy成功的培养了葡萄茎尖，并开始了葡萄低温离体保存，首创节培法。Mullines和Srinivasan（1976）第一个报道了葡萄体细胞胚胎发生。1978年曹孜义等从欧亚品种葡萄花药培养诱导出大量二倍体植株，同年Krul等也从杂种葡萄花药愈伤组织上诱导出大量不

3、定胚。1978年Barlass和Skene报道了葡萄试管繁殖技术。1979年曹孜义等再国内首先报道了葡萄试管繁殖技术，并于次年建立了我国第一个植物组织培养的葡萄园。齐与枢、曹孜义等历经8年，完成了葡萄试管繁殖生产技术试验，并取得明显的经济效益和社会效益。1989年Mullines在第五界国际葡萄育种学术讨论会，做了“组织培养在葡萄遗传改良育种中的应用”的大会报告，总结了这方面的研究进展。“七五”、“八五”期间，国家把“葡萄脱毒及无苗试管繁殖技术”列入攻关计划，组织全国有关专家协作攻关，使葡萄离体快繁技术得到了很快的发展和应用。1.2葡萄

4、试管快繁的意义[1]“葡萄试管繁殖是葡萄组织培养实际应用最多、最有成效和最成熟的一项生物技术。”1.2.1用语希缺良种的快速繁殖对新育成或选育的单株或新引进的良种，利用试管繁殖，可在短期内大量提供这些急需的良种苗木，以满足生产上的需要。“如Harris等（1982）用巴可品种3——4mm长的茎，4[21]个月生产出1.2完株苗Barlass等（1978）培养葡萄茎尖4个月成苗8000株。”“Monette(1989)用常规硬枝扦插1年仅得到12株苗，而试管苗繁殖每月得到了2000株苗。曹孜义、齐与枢等采用葡萄茎段培养，每月能增殖2.4—

5、—8.2倍，推算一个苗一年理论上可繁殖8.76万——222.3万株苗，实际上已做到一株先锋试管苗一年繁殖了3.1万株成苗。另外，一些珍惜杂交品种、纯合植株或转基因植株、多倍体植株也可用此法快速扩大繁殖。1.2.2用于脱除病毒葡萄病毒类型繁多，危害较大，致使葡萄产量降低，品质变劣，病毒又很难防治，成为生产上一大威胁。利用热处理和茎尖培养相结合方法能有效的脱除病毒，该项技术已在国内外广泛应用。-1-http://www.paper.edu.cn1.2.3试管苗便于葡萄种质交换和保存葡萄试管苗无病虫，若在经过脱毒和鉴定为无病毒苗，则更便于地区

6、间、国际间品种和种质资源的传递与交换，节省检疫和防治的人力、才力和时间。用试管苗保存葡萄种质，节省大量土地、劳力和时间，也免受病虫、病毒的侵染。1.2.4有利于病理学、生理学及其他理论研究利用葡萄组织培养，常年均可提供生长旺盛的苗木或组织、细胞，供病理学、生理学研究，它是筛选杀菌剂和抗病品种及筛选植物激素的方法。组织培养空间小，条件易控制，不受季节限制，在加快遗传学、细胞学、生化学研究方面均有重要意义。2.葡萄外植体的采集和消毒2.1外植体〔explant〕是从植物体上分离下来的用于离体培养的材料。组织培养所用的培养材料非常广泛，可采取

7、根、茎、叶、花、芽和种子的子叶，有时也利用花粉粒和花药，其中根尖不易灭菌，一般很少采用。[19]在快速繁殖中，“最常用的培养材料是茎尖，通常切块在0.5厘米左右”，如果为培养无病毒苗而采用的培养材料通常仅取茎尖的分生组织部分，其长度在0.1毫米以下。葡萄脱毒过程中，外植体的大小与脱毒率高低成相关性，特别是茎尖培养，外植体太大不利于脱除病毒，太小又不容易培养成活，而且也不利于茎的生根。所以选取外植体的大小适宜在葡萄脱毒过程中应要掌握好，只要培养方法得当，用较大的茎尖作外植体，其消除病毒的效果也会很好，不一定都要用茎尖分生组织进行脱毒培养。

8、葡萄在茎尖培养中，光的效果通常要比暗培养好。一般多采用光培养的方式，“试管苗培养[19]适宜的温度是25+/-2度。”2.2防止外植体带菌2.2.1选择好外植体采集时期和采集部位2.2.1.1外植体采集以春