gb-t14702-2002 饲料中维生素b6的测定 高效液相色谱法

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1、ICs65120B46中华人民共和国国家标准GB/T14702-2002代替GB/T14702-1993饲料中维生素B6的测定高效液相色谱法DeterminationofvitaminB6infeeds-High-performanceofliquidchromatography2002门0一31发布2003一04一01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局GB/'r14702-2002oU吕本标准修订了GB/T14702-1993《饲料中维生素B。的测定方法》，较修订前具有高效、快捷、准确的特点。本标准参考“化学分析协会”第六十七期发表的《复合

2、预混料中抗坏血酸、烟酞胺、毗哆醇、硫胺素及核黄素的液相色谱分析方法》而制定。本标准与GB/T14702-1993的主要技术差异:标准规定了高效液相色谱法测定饲料中的维生素Bs，确定了试样的提取条件、色谱条件、重复性要求;确定了适用范围为维生素B。含量大于30mg/kg的复合预混合饲料及维生素预混合饲料本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位:国家饲料质量监督检验中心(北京)。本标准主要起草人:李兰、陈必芳、索德成、杨文军。本标准所代替标准的历次版本发布情况为:GB/T14702-1993GB/T14702-2002饲料中维生素B6的

3、测定高效液相色谱法范围本标准规定了用高效液相色谱仪测定饲料中维生素B。含量的方法本标准适用于维生素B。含量大于30mg/kg的复合预混合饲料、维生素预混合饲料的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样方法3原理试样中维生素B。经酸性提取液超声提取后，注

4、人高效液相色谱仪反相色谱系统中进行分离，用紫外检测器(或二极管矩阵检测器)检测，外标法计算维生素B。的含量。4试剂和溶液除特殊说明外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水，色谱用水为去离子水，符合GB/T6682.1中一级用水规定。4.1乙二胺四乙酸二钠(EDTA)4.2庚烷磺酸钠(PICB)，优级纯。4.3冰乙酸，优级纯。44三乙胺，色谱纯。45甲醇，色谱纯。4.6盐酸溶液，c(HCD=0.1mol/L.4.7提取液:在已装人约700mL/L去离子水的1000m工一容量瓶中，加人50mgEDTA(4.1)待全部溶解后，加人25m工冰乙酸(4.3),5mI三乙

5、胺(4-4)，用去离子水定容至刻度摇匀。取860mL上述溶液与140ml，甲醇混合，即得。4.8流动相:在已装人约700mL去离子水的1000mL容量瓶中，称人50mg(精确至0.001g)EDTA(4.1),1.1g(精确至0.001g)庚烷磺酸钠(4-2)，待全部溶解后加入25mL冰乙酸(4.3),5mL三乙胺(4-4)，用去离子水定容至刻度摇匀。用冰乙酸、三乙胺调节该溶液pH至3.40士。02，过0.45pm滤膜。取该溶液860ml与140ml,甲醇(4-5)混合，超声脱气，待用。4.9维生素B。标准溶液:a)维生素B。标准贮备液:准确称取维生素B

6、s0.0500g于100ml棕色容量瓶中，加盐酸溶液(4-6)约三分之二体积，超声15min，待全部溶解后，用盐酸溶液(4.6)定容至刻度。此溶液浓度为500tpg/ml，冰箱4C避光保存，可使用3个月。GB/T14702-2002维生素B。标准工作液A:准确吸取2.00mL维生素B。标准贮备液「4.9a)〕于50m工_棕色容量瓶中，用流动相(4.8)定容至刻度。该标准工作液浓度为20pg/mL,维生素B。标准工作液B:准确吸取5.00ml维生素B。标准工作液A巨.9b)〕于50mL棕色容量瓶中，用流动相(4-8)定容至刻度。该标准工作液浓度为2.0pg

7、/mL.5仪器、设备月..实验室常用玻璃器皿。仗，口LpH计(带温控，精确至。.01).‘八j口超声波提取器。反月﹃︺针头过滤器，备。.45pm(或。.2pm)滤膜。‘口高效液相色谱仪，带紫外或二极管矩阵检测器。6试样的制备按GB/T14699.1采样，选取有代表性的饲料样品至少500g，四分法缩减至100g，磨碎，全部通过0.28mm孔筛，混匀，装人密闭容器中，避光低温保存备用。了分析步骤以下操作避光进行。7.1试样溶液的制备称取维生素预混合饲料。.25g-0.50g，精确至。.0001g;复合预混合饲料2g-3g，精确至0.001g，于100ml棕色

8、容量瓶中，加人三分之二体积的提取液(4.7)在超声波提取器(5-3)中超声提取2