GBT17817-1999 饲料中维生素A的测定 高效液相色谱法.pdf

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1、GB/'e17817-1999前言饲料中维生素A的测定目前尚无国际标准，本标准是在参照瑞士罗氏药品化学有限公司维生素研究部发表的《饲料中维生素和类胡萝卜素—现代分析方法)’用高效液相色谱法测定配合饲料、预混合饲料和浓缩维生素中维生素A”而制定的。在技术内容上参照该法，在编写格式上依据GB/丁1.11993《标准化工作导则第1单元:标准的起草与表述规则第1部分:标准编写的基本规定》和GB/T1.4--1988《标准化工作导则化学分析方法标准编写规定》。为了使饲料中维生素A测定方法科学、准确、经济、实用，适合于我国不同实验室大量饲料样品的测定，在参照国外分析方法的基础上增加了反相

2、色谱测定条件。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。本标准由国家饲料质量监督检验中心(北京)负责起草。本标准主要起草人:陈必芳、赵小阳、李俊玲。.www.bzxzk.com.中华人民共和国国家标准饲料中维生素A的测定GB/T17817-1999高效液相色谱法DeterminationofvitaminAinfeeds-High-pressureliquidchromatography1范围本标准规定了饲料中维生素A的测定—高效液相色谱法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、复合预混料和维生素预混料中维生素A的测定。测量范围为每千克样品中含维生素A在1OOOIU以上。2引

3、用标准F列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法3方法原理用碱溶液皂化试验样品，乙醚提取未皂化的化合物，燕发乙醚并将残渣落解于正己烷中，将正己烷提取物注入用硅胶填充的高效液相色谱柱，用紫外检测器测定，外标法计算维生素A含量。4试荆和材料除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水，色谱用水为去离子水，符合GB/T6682中用水规定。4门无水乙醚(无过氧化物)。4门1过氧化物检查方法:用5mL乙醚加

4、1mL10%碘化钾溶液，振摇1min，如有过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色。若加。.5%淀粉指示液，水层呈蓝色。该乙醚需处理后使用。4.1.2去除过氧化物的方法:乙醚用5%硫代硫酸钠溶液振摇，静置，分取乙醚层，再用蒸馏水振摇洗涤两次，重蒸，弃去首尾5%部分，收集馏出的乙醚，再检查过氧化物，应符合规定。4.2乙醇。4.3正己烷:重蒸馏(或光谱纯)。4.4异丙醇:重燕馏。4.5甲醇:优级纯4.62.6一二叔丁基对甲酚(BHT)4.7无水硫酸钠。4.8氢氧化钾溶液500g/I。国家质2技术监督局1999一08一10批准2000一02-01实施.www.bzxzk.com.Gs/T1

5、7817-19994.9抗坏血酸乙醇溶液5g/I_:取0.5g抗坏血酸结晶纯品溶解于4mL温热的蒸馏水中，用乙醇稀释至100ml，临用前配制。4.10维生素A标准溶液4.10门维生素A标准贮备液:准确称取维生素A乙酸酷油剂(每克含1.00X106IU)0.1000g或结晶纯品。.0344g(符合中国药典)于皂化瓶中，按分析步骤(7-1)皂化和提取，将乙醚提取液全部浓缩蒸发至干，用正己烷溶解残渣置入100mL棕色容量瓶中并稀释至刻度，混匀，4C保存。该贮备液浓度为每毫升含1ooolu维生素A,4.10.2维生素A标准工作液:准确吸取1.00mL维生素A标准贮备液(4.10.1)

6、，用正己烷(4.3)稀释10。倍;若用反相色谱测定，将1.00mL维生素A标准贮备液置人10ml棕色小容量瓶中，用氮气吹干，用甲醇(4.5)溶解并稀释至刻度，混匀，再按1:10比例稀释。该标准工作液浓度为每毫升含lOIU维生素Aa4.11酚酞指示剂乙醇溶液10g/Lo4.12氮气99.9。5仪器、设备51实验室常用仪器、设备。刘圆底烧瓶，带回流冷凝器。刘恒温水浴或电热套。5.4旋转蒸发器。劝超纯水器(或全磨口玻璃蒸馏器)。56高效液相色谱仪，带紫外检测器。6试样的制备选取有代表性的饲料样品至少500g，四分法缩减至100g，磨碎，全部通过。.28mm孔筛，混匀，装入密闭容器中

7、，避光低温保存备用。了分析步骤7门试验溶液的制备7.1.1皂化称取配合饲料或浓缩饲料10g，精确至。.001g。维生素预混料或复合预混料1-5g.精确至0.0001g置入250mL圆底烧瓶中，加50mL抗坏血酸乙醇溶液(4-9)，使试样完全分散、浸湿，加10ml-氢氧化钾溶液(4.8)，混匀。置于沸水浴上回流30min，不时振荡防止试样粘附在瓶壁上，皂化结束，分别用5MI乙醉,5mL水自冷凝管顶端冲洗其内部，取出烧瓶冷却至约40'C.7.1.2提取定量转移全部皂化液于盛有100mL乙醚(4.1)的500