gb-t15400-1994 饲料中色氨酸测定方法--分光光度法

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1、中华人民共和国国家标准饲料中色氨酸测定方法GB/T15400一94分光光度法Determinationoftryptophaninfeedstuffs-Spectrophotometry1主题内容与适用范围本标准规定了测定饲料中色氨酸的原理和方法。本标准适用于配合饲料、混合饲料、浓缩饲料和单一饲料。2引用标准GB6433饲料粗脂肪测定方法3原理饲料中蛋白质经碱水解后，降解成多肤和游离的氨基酸，在酸性介质中，氧化剂存在下，色氦酸U91环与对二甲氨基苯甲醛反应生成蓝色化合物，在一定范围内颜色深浅与色氨酸含量成正比。4试剂除注明者外均为分析纯。水为蒸馏水。4

2、.1硫酸(GB625)溶液、c(1/2H2SO4)=21.2mot/L垦取589ml硫酸徐徐加入约350mL水中，冷却后用水稀释至1L.4.21%对二甲氨基苯甲醛溶液:1.0g对二甲氨基苯甲醛溶于21.2mot/L硫酸(4.1)中并定容100mL,4.30.2%亚硝酸钠(GB633)溶液(m/V),4.4lo/氢氧化钾(GB2306)溶液(m/V)4.Sl,色氨酸，色谱纯。4.61,色氨酸标准溶液:准确称取25.0mgL一色氨酸于小烧杯中，加少量0.1MOl/I氢氧化钾溶液使之溶解，定量地转移到250ml棕色容量瓶中，用水定容，浓度为100pg/mL注

3、:本标准溶液4℃冰箱中保存，一个月内使用，浓度不变.5仪器、设备51分析天平:感量。.1mg,52分光光度计。53离心机:转速4000r/min,54实验室用粉碎机国家技术监督局1994一12一30批准1995一07一01实施GB/T15400一94乐‘︺培养箱。乐八匕容觉瓶:25ml-,50mL,250mL,57口10in[-具塞试管。5.OU刻度吸管:。.5mL,2ml-5mL,25ml。6试样的制备6.1选取有代表性的试样，按四分法缩分至200g，粉碎，全部通过。.25mm孔径筛(6。目)6.2按GB6433脱脂并测定脂肪含量。脱脂样品风干后，混

4、匀，装入密封容器内备用。了分析步骤了门皿作曲线的绘制7.1.1吸取色氨酸浓度为100pg/mL的标准溶液(4.6)5.00,7.50,10.00,12.50,15.00,17.50mL分别置于25ml,棕色容量瓶中用水定容，摇匀。溶液浓度分别为20,30,40,50,60,70pg/m工一。7.1.2吸取各浓度溶液(7.1.1)1mL，分置具塞试管(5.7)中，空白管加1mL水。向每支试管内加入氢氧化钾溶液(4.4)1ml，混匀，将试管放入冷水盆中，加5mL对二甲氨基苯甲醛溶液(4.2).从冷水盆中取出试管，摇匀，在室温(20-30'C，下同)放置30

5、min,7.1.3向上述每支试管内加。.2mL亚硝酸钠溶液(4.3)，摇匀，室温放置25min,7.1.4以空白管调零，在590nm波长下，以1cm光径测定各溶液吸光度值。7.1.5以色氨酸浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制工作曲线，或列出回归方程式7.2样品测定7.2.1称样:按附表A建议的称样量称取脱脂试样两份，精确至0_lmg,7.2.2水解:将试样置于50mL容量瓶(5.6)中，在轻轻振摇中缓慢加入25ml氢氧化钾溶液(4.4),使试样湿润且不粘壁，置于4011℃培养箱(3.5)中水解16^18h,7.2.3离心:取出水解液冷却至室温后，用水

6、定容，播匀，取部分水解液以4000r/min转速离心15min,7.2.4显色:取2mL上清液置具塞试管(5.7)中，并将试管放入冷水盆中，加入5mL对二甲氨基苯甲醛溶液(4.2)，摇匀。每个试样另取2mL上清液于具塞试管(5.7)中，加5m1硫酸溶液(4.1)作为样品空白，摇匀，室温放置30min。然后向每支试管内加入。.2mL亚硝酸钠溶液(4.3)，摇匀，室温放置25min,7.2.5比色:以样品空白调零，在590nm波长处1cm光径测定样品溶液的吸光度值。8分析结果的表述乐1计算公式AX25色氨酸(脱脂样)(%)X100MX10'一AX25X(1

7、一F)色氨酸(原样)(%)X100一MX10,式中。—脱脂试样质量,mg;A—从工作曲线上查得色氨酸含量,Kg;F-月旨肪分率。8.2结果的表示Ga/T15400一94两个平行样品的测定结果用算术平均值表示，保留二位小数。试样脂肪含量小于4%时，式(1)和(2)所得结果在允许偏差之内8.3重复性两个平行样品测定值的相对偏差，当色氨酸含量小于。.1%时.不大于4%;0.10%一0.50%时，不大于3%;大于。50%时，不大于2%0GB/T15400一94附录A称样t(参考件)根据样品蛋白质、色氨酸含量确定称样量，经试验研究建议不同饲料称样量如下:蛋白质含

8、量，%饲料种类称样量,mg10以下高粱、玉米650--70011^20小麦、大麦、糠数、糠饼、