共表达亚洲ⅰ型fmdv p12a3c和il18基因重组鸡痘病毒表达质粒构建

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1、猪的传染病于同时间点内多链泛素化蛋白的含量。这表明。灭活FMDv抗原在MDDC内主要由溶酶体降解。由于在3h后MoDC内FMDv抗原可同时被多链泛素化和单链泛素化，故认为，灭活舯v抗原在MoDC内有两条抗原提呈途径．即MHC．I途径和MHc．II途径。从图4和图5可以清楚地看出，在荷载灭活补{DV后3h，MoDC内单链泛素化过程明显增强，这可能是DC促进体液免疫应答的一种机制。综上所述，以灭活蹦Dv荷载Dc可以使病毒抗原泛素化，其中包括多链泛素化和单链泛素化两种途径。从分子量的大小来看，这种泛素化蛋白很可能就是vPl，并且以单链泛素化为主，这

2、进一步证实了DC是FMDv的抗原提呈细胞的观点。参考文献略共表达亚洲I型FMDVP1．2A．3C和ILl8基因重组鸡痘病毒表达质粒构建霍晓伟113金宁一1鲁会军‘答长维‘卑伟锋。常巧成4马鸣潇5(Ir军事医学科学院Il所长春130062；2．吉林大学畜牧兽医学院长春130062；3．内蒙古民族大学动物科技学院内蒙古通辽028000；4诞遗走学农学院吉林延遗龙并13300I；5．辽宁医学院畜牧善医学院辽宁锦州12100I)捕蔓口琦疫是世界各国十分重视的政治病和经济病，一旦发生，会给谊国的吉牧业生产和动物厦动物产品的出口造成毁灭性的打击．除时发痛

3、的动物进行捕杀销毁外，最重要的是对易感动物进行免疫接种．由于传统疫苗有很多不足，研究高效，廉价．安全疫苗是当务之急．我们在本室研究的基础上，成功地构建了共表达亚洲I型FMDvPl．2A．3C和ILl8基因重组鸡痘病毒表速质粒，为进一步筛选亚洲I型FMDv重组鸡痘病毒疫苗奠定基础．关键词亚洲I型FMDv；Pl，2A-3c；lLl8；重组鸪痘病毒：表达质粒对于口蹄疫疾病的控制，大多采用对患病动物进行屠宰焚烧或者使用传统的病毒灭活疫苗免疫接种。虽然传统的病毒灭活疫苗对防治口蹄疫有效，但其热稳定性差，不宜运输和储藏，安全性也存在一定的问题。因此，研制

4、有效、安全、经济的新型口蹄疫疫苗，对于促进畜牧业的发展尤为重要。随着分子生物学技术的飞速发展．FMD基因工程疫苗如亚单位疫苗，可饲疫苗、合成肽疫苗、蛋白质载体疫苗、基因缺失疫苗、活载体疫苗、核酸疫苗等已成为FMD疫苗研究的热点。FMDV基因开放编码框由L基因、Pl结构蛋白基因、P2和P3非结构蛋白基因以及起始密码子和终止密码子组成，其中Pl结构蛋白基因编码4种主要的衣壳蛋白，2A参与病毒蛋白的裂解，与Pl和3c双基因共同表达有关。3c蛋白酶催化P1聚蛋白的次级裂解，与成熟痛毒粒子的形成即病毒衣壳组装密切相关。3c蛋白酶还能裂解宿主的组蛋白H3

5、．阻断宿主细胞的转录．并诱导对宿主细胞的翻译起始因子eIF4A和eIF4G的切割，关闭帽结构宿主细胞蛋白的合成，为病毒蛋白的合成创造条件。IL．18是一种新近发现的细胞因子，具有多种生物学功能。它由单核．巨噬细胞和上皮细胞产生，可激活NK细胞，刺激激活的T细胞产生GMCSF、IL-2、IFN≈，抑制激活的T细胞产生IL·lO。研究发王见，它可通过调节IFN的表达提高机体的免疫水平，起到免疫佐剂作用．从而达到控制和预防微生物感染。笔者根据本室的成功地构建的重组鸡痘病毒表达质粒的基础上，利用亚洲I型FMDv衣壳蛋白前体Pl、2A基因、蛋白酶3c基

6、因及lL．18基因(猪白介素18基因)，构建了共表达亚洲I型FMDvP1．2A，3c和ILl8基因重组鸡痘病毒表达质粒，为筛选安全、高效、低成本的亚洲I型FMD重组鸡疸疫苗做好准备。1材料与方法1．1材料1．1．1毒株中国膏牧鲁医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会As．a-t／JL株F^dDV由本室保存。从疫区的牛水疱液、破溃的水疱皮中分离，经反相间接红细胞凝集试验鉴定为Asia．1型FMDv．1．1．2酶及试剂Ex呦DNA聚合酶、T4DNA连接酶、逆转录酶、RNA酶及各种限制性内切酶、RT．PcR试剂盒RNALAPCRKi《AMv)、R

7、NA提取试剂盒11uzolReagem、PCR产物连接试剂盒pMDl8-T、RNA酶及各种限制性内切酶、DNA回收试剂盒等分别购自TaKaRa、Invi订ogell、Prolnega、sigIna和华美生物工程公司。PLrrALO^^T-ILl8均由军事医学科学院十一所病毒室构建及保存。感受态菌DH5a大肠杆菌也由该室保存。1．2方法I．2．1引物设计和告成根据国外已发表的Asia_l型FMDV毒株序列IND63，72。(AY304994)：Asia．1／Jj锄gsu，chi腑，2005(EFl49009)和越ial-2isrl3-63is0

8、6(AY593796)为参考毒株，设计井合成了1对FMDVP1．2A基因特异引物Pl：5、．A1昭GGAGCCGGGCAATCCA．3：5’-GAAGGGCCCAG