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1、浙江大学远程教育学院本科生毕业论文（设计）开题报告题目黄酮类化合物的提取分离及其含量测定专业药学学习中心无锡姓名吴小燕学号B指导教师徐娟华2011年10月09日1论文摘要综述了黄酮类化合物提取方法(溶剂法、微波法、酶解法、超临界流体萃取法、双水相萃取法、超声波提取法),分离纯化方法(柱层析法、薄层层析法、高效液相色谱法、纸层析法、超临界流体分离法、大孔树脂吸附法、液滴逆流层析法、梯度pH值萃取法、金属试剂络合沉淀法、膜分离法、活性炭吸附法),黄酮含量测定方法(分光光度法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、超临界流体色谱法、薄层扫描法),为黄酮类化合物研究工作者
2、提供参考。关键词：黄酮类化合物，提取，分离，含量测定2目录一、黄酮类化合物提取方法5（一）溶剂法5（二）微波法5（三）酶解法5-6（四）超临界流体萃取法6（五）双水相萃取分离法6（六）超声波提取法6二、黄酮类化合物分离纯化方法6（一）柱层析法6-7（二）薄层层析法(TLC)7（三）高效液相色谱法(HPLC)7（四）纸层析法7（五）超临界流体萃取分离法7（六）大孔树脂吸附法7-8（七）液滴逆流层析法8（八）梯度pH值萃取法8（九）金属试剂络合沉淀法8（十）膜分离法8（十一）活性炭吸附法8-9三、黄酮类化合物含量测定方法9（一）分光光度法9（二）高效液相色谱法
3、(HPLC)9（三）毛细管电泳法9（四）超临界流体色谱法9（五）薄层扫描法9-10（六）其他方法极谱法灵敏、方便、快速10四、参考文献10-123引言黄酮类化合物是一类在植物界中分布广泛、具有多种生物活性的多酚类化合物[1-2]。如白果双黄酮和葛根总黄酮等,对心血管疾病有治疗作用;木犀草素、羟基芫花素和杜鹃素等能治疗气管炎;竹叶黄酮具有优良的抗自由基、抗氧化、抗衰老、降血脂、免疫调节、抗菌等生物学功效,在人类的营养、健康和疾病防治上有着广阔的应用前景[3]。自1965年德国科学家首先发现了银杏叶中含有降低胆固醇的有效成分以来,对银杏叶中黄酮类化学成分、药理
4、药效与应用方面的研究一直是该领域的热点[4]。有些黄酮类成分已正式投入药物生产,如槲皮素片、黄芩甙片和银杏叶制剂等。4一、黄酮类化合物提取方法(一)溶剂法。1、水提法。水提法适于黄酮甙类物质提取。该法成本低、对环境及人类无毒害、设备简单,适合工业化大生产,但提取率低,提取物中杂质较多(如无机盐、蛋白质、糖类等),后续分离麻烦,现在很少单一使用该法。胡敏等对水提法作了改进,使所得银杏提取物(GBE)中总黄酮的含量有所提高[5]2、碱性水或碱性稀醇提取法。黄酮类化合物大多具有酚羟基,易溶于碱水,酸化后又可沉淀析出。其原因一是由于黄酮酚羟基的酸性,二是由于黄酮母
5、核在碱性条件下开环,形成2′!羟基查耳酮,极性增大而溶解。因此可用碱性水(碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钙水溶液)或碱性稀醇(50%乙醇)浸出,浸出液经酸化后析出黄酮类化合物。氢氧化钠水溶液的浸出能力高,但杂质较多,不利于纯化。当植物材料(如花和果实)含有较多的果胶、黏液质、鞣质及水溶性杂质时,宜采用石灰水,使它们与氢氧化钙生成钙盐沉淀滤除,但浸出效果不如氢氧化钠水溶液好,同时有些黄酮类化合物能与钙结合成不溶性物质被滤除。一般可以根据不同的原料使用不同碱性溶液。丁利君等用pH值为10的氢氧化钠溶液从菊花中提取黄酮类物质时,效果较好[6]。曹永刚用碱性较强的饱和石
6、灰水从魁米中提取芦丁,使芦丁成盐溶解,效果好[7]。一般应注意酸碱性不宜过强,以免强碱在加热时破坏黄酮,也防止在酸化时生成盐,使析出的黄酮又复分解,影响收得率。3、有机溶剂提取法。根据黄酮类化合物与杂质极性同来选择适合的有机溶剂,常用乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇、水或某些极性较大的混合溶剂如甲醇∶水(1∶1)进行提取。一般游离甙元,难溶或不溶于水,易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、丙酮、石油醚等有机溶剂及稀碱液中,黄酮甙类易溶于水、甲醇、乙醇等强极性的溶剂中,故浓度90%~95%的乙醇适宜提取黄酮甙元,60%左右的乙醇适宜提取黄酮甙类。许钢等用70%丙酮提取
7、竹叶黄酮,提取率达95.5%[8]。王兰珍等用70%乙醇冷浸,从元宝枫叶粉中提取黄酮类物质,提取率和黄酮含量都很高,提取物易于浓缩和干燥[9]。（二）微波法微波法原理是利用磁控管所产生的24.5亿次/s超高频率的快速震动,使材料内分子间相互碰撞、挤压,利于有效成分的浸出。此法不仅具有反应高效性和强选择性等特点,还具有操作简单、副产物少、产率高及产物易提纯等优点。浸出过程中材料细粉不凝聚、不糊化,克服了热水法易凝聚、糊化的不足。范志刚等用微波法提取雪莲黄酮类物质,提高了雪莲的利用率[10]。4（三）酶解法酶解法对于一些黄酮类物质被细胞壁包围不易提取的原料比较
8、实用。原理是能够充分破坏以纤维素为主的细胞壁结构及其细胞间相连的果
