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1、2007年第3期食品工程79月出版FOODENGINEERING"!!!!!!"!·!"综!述!!评!论!·!"分子生物学方法在食品安全检测中的应用Theapplicationofmolecularbiologymethodstechnologiesinfoodtesting*王鑫车振明黄韬睿(西华大学生物工程学院,成都610039)*WangXinCheZhen-mingHuangTao-rui(Collegeofbioengineering,Xihuauniversity,Chengdu610039,China)摘要综述了食品中
2、病原微生物的快速检测方链式反应,也称无细胞克隆系统,是1985年诞生的法,详述了PCR技术和基因芯片这两种技术的研究一项DNA体外扩增技术,该技术自问世以来,就以进展,并对这两种方法特点与应用进行了探讨。惊人的速度广泛地应用于生命科学的众多领域。目前关键词食品安全微生物PCR基因芯片检在食品工程领域中致病性微生物、转基因食品的检测测方法等方面的应用也越来越受关注。AbstractThearticleintroducestherapiddetectionsof1.1PCR技术的基本原理与方法pathogenicmicrobeinfoo
3、d,detailsaboutthedevelop-PCR技术是一种利用DNA变性与复性原理,mentofPCRandgenechiptechnology,anddiscusse在体外利用DNA聚合酶活性,在引物的引导和脱featuresandapplicationofthesetwomethods.氧核糖核苷酸(dNTP)等参与下将模板DNA在数小时keywordsFoodsafetyMicrobePCRGenechip内进行百万倍扩增。该技术利用两段寡核苷酸作为Detectiontechnology反应的引物,以及四种脱氧核苷三磷
4、酸dNTP、DNA聚合酶作为反应物,将提取到的DNA(称为模在2006年,我国食品安全事件频发,福寿螺板DNA)片段精确扩增。该酶促反应最基本的3个事件、人造蜂蜜事件、毒猪油事件、多宝鱼事件等环节是:①模板DNA的变性,即在94℃下模板双等都再次给人们敲响了食品安全的警钟。随着食品链DNA变为单链DNA;②引物与模板链的特异性工业的发展以及对食品安全的重视,传统分析方法复性;③由TaqDNA聚合酶催化引物引导DNA链已经远不能满足食品检测的需要,迫切需要灵敏度由5'向3'延伸,从而完成一个变性-复性-延伸更高、特异性更强、简便快捷的
5、食品安全检测技术的PCR循环。至此完成了PCR的第一轮反应,而和方法。因此,近年来世界各国的许多机构和学者后反复进行变性、复性和延伸的循环,从而使扩增都致力于快速检测技术和方法的研究,改进和开发DNA产量呈指数上升。了一些快速的检测技术和方法,现将几种主要方法1.2PCR技术在食品微生物检测方面的应用概述如下。1.2.1单核细胞增多性李斯特氏菌单核细胞增多性李斯特氏菌(Listeriamonocy-1PCR技术toyenes,LM)是一种重要的人畜共患病致病病菌,能引起人和动物脑膜炎、败血症及孕妇流产等,且PCR(Polymeras
6、eChainReaction)技术即聚合酶死亡率极高,可达30%～70%。LM广泛存在于动*王鑫,女,1983年出生,西华大学生物工程学院在读硕士物、水产品等中,主要通过食物进行传播。过去对研究生。食品中LM进行检测时,克隆培养的标准方法需要收稿日期:2007-05-143～4周的时间才能得出结果;血清学检测方法(如2007年第3期8食品工程9月出版ELISA等)也存在着特异性、敏感性差等问题。PCR以采取相应的防范、控制与清洗措施。技术的出现给李氏菌的检测带来了曙光。姜永强等PCR技术能使微量的核酸在数小时之内扩增至根据发表的单核
7、细胞增生性李斯特菌的重要毒力基原来的数百万倍以上,只要选择适合的引物,就可因hlyA的全基因序列,设计出引物,建立了该菌特异性地大量扩增某一特定的DNA片断至易检测的PCR诊断方法。金大智等运用实时荧光PCR(Re-水平。因此理论上可以通过特异性地扩增耐热菌的al-timePCR)技术建立对食品中单增李氏菌进行检基因片断而对其实现快速检测。测的快速方法,设计的引物和探针的序列特异性1.3PCR技术存在的主要问题及展望强,省去凝胶电泳的繁琐,降低了污染的可能性。PCR技术虽为一种快速、特异、灵敏、简便、对26种病原菌进行的检测结果表明
8、,用实时荧光高效的检测新技术,但其在食品中致毒、致病性微PCR法检测单核细胞增多李斯特氏菌,更快速、敏生物检测的实际应用中也存在不少问题,必须认真感、特异性更高。分析各种具体情况,采取必要的措施,以提高反应1.2.2金黄色葡萄球菌的特
