铁蛋白免疫测定用标准品的研制及标定

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1、第10卷第3期同　位　素Vol.10No.31997年8月JournalofIsotopesAug.1997铁蛋白免疫测定用标准品的研制及标定沈洪征　焦　岩　徐立根(中国药品生物制品检定所,北京100050)铁蛋白原料经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析未见杂质色带,蛋白定量分析为1106göL;用放射免疫分析方法标定其免疫活性为11015göL,其剂量2反应曲线与人铁蛋白第二次国际标准品(编号80ö578)平行,表明该原料适于制作标准品。用含1%人血清白蛋白的磷酸盐缓冲液配制的1125mg铁蛋白原料按每安瓶2Lg分装,经冷冻干燥制备成标准品。以铁蛋白国际标准品为对照品,用放射免疫分析法

2、对其免疫活性进行标定,均值为11962Lgö支。分别以国际标准品和本标准品为对照品测定同一套铁蛋白质控血清,证明对不同浓度水平的质控血清测定均值非常接近,且在统计学上无显著差异。关键词　铁蛋白　国际标准品　国家标准品　免疫测定　标定铁蛋白放射免疫药盒在我国得到广泛应用,为临床诊断缺铁性贫血、铁负荷过度、肿瘤及[1,2]癌症等疾病提供了重要的数据和信息。国内主要放射免疫分析药盒生产厂家都有此产品,但没有一种既准确又易得的标准物质供生产过程中标定药盒装箱标准品用,这不但使铁蛋白药盒标准品质量不稳定,造成临床样品测定结果偏差,也给我国铁蛋白放射免疫药盒标准化和与国外交流工作带来困难

3、。为解决我国急需,在获得WHO制备的国际标准品后,立即着手研制铁蛋白标准品。1　实验材料(1)铁蛋白国际标准品:即HumanFerritin2ndIS(80ö578),由英国国家生物标准品及检[3,4]定研究所(NIBSC)获得。每支含从人脾脏提取的铁蛋白917Lg。(2)铁蛋白原料:中国原子能科学研究院同位素研究所提供。(3)铁蛋白放射免疫分析药盒:中国原子能科学研究院同位素研究所、北京北方免疫试剂研究所和山东3V诊断技术公司提供。(4)人血清白蛋白:由美国Sigma公司提供。其它试剂皆为国产分析纯试剂。2　实验方法2.1　标准品原料检验对中国原子能科学研究院提供的铁蛋白原

4、料进行纯度及免疫活性分析,经聚丙烯酰胺凝收稿日期:1996211213　　修改稿收到日期:1997202221136同　位　素　　　　　　　　　　　　　　　　　第10卷　胶电泳分析仅呈现一条铁蛋白主带和一条微弱的铁蛋白聚合物色带,蛋白定量分析为1106göL;以铁蛋白国际标准品(80ö578)为对照品,用放射免疫分析方法标定其免疫活性,结果为11015mgömL(s=0.077,CV=7.55%,n=3),二者剂量2反应曲线平行且与蛋白定量分析结果一致,这证明该原料可做为国家标准品原料使用。2.2　标准品的制备准确量取铁蛋白原料液1125mL置于500mL容量瓶中,以含1%(

5、wöV)人血清白蛋白的磷酸盐缓冲液(0101molöL,pH7.4)稀释至刻度,充分混匀,用定量分装器按018mL分装到215mL真空安瓶中,放入冻干机中深冻、抽干。干燥过程完成后,立即进行熔封,经水中负压检漏,得到合格制品536支。定量分装器最大分装误差0165%;深冻时间2h,温度-50℃,冻干时间22h,最高温升22℃;最终真空度0107mPa;熔封时间55min,室温19℃,相对湿度32%。标准品于1994年10月17日在中国药品生物制品检定所分包装室制备。2.3　免疫活性标定以WHO铁蛋白国际标准品为对照品,用放射免疫分析法对待测标准品免疫活性进行标定。首先组织用新

6、鲜配制的国际标准品进行协作标定,然后由中国药品生物制品检定所用深冻保存的国际标准品进行复核标定。小心锯开铁蛋白国际标准品(80ö578),以917mL含1%人血清白蛋白磷酸盐缓冲液溶解其全部内容物,充分混匀,立即交协作标定人员做标定实验,剩余部分马上按015mLö瓶分装、密封、置-30℃保存。各协作标定人员用自己使用药盒的零标准,按各自装箱标准品剂量值将国际标准品稀释成系列标准液,并按2Lgö支估计免疫活性将待测标准品以同样方法稀释成系列标准液,同时进行放射免疫分析测定。3　实验结果3.1　标准品免疫活性标定结果(1)以新鲜配制的国际标准品进行协作标定,用中国原子能科学研究院

7、药盒获得8组结果、北京北方免疫试剂研究所药盒获得6组结果、山东3V诊断技术公司药盒获得3组结果。17组结果总计,其均值为11920Lgö支(s=0.192,CV=1017%),具体数据列于表1。(2)中国药品生物制品检定所以深冻保存的国际标准品,用上述3种药盒进行复核标定,共得到15组结果,其均值为21004Lgö支(s=0.206,CV=10.3%),具体数据列于表2。　　上述标定均进行国际标准品和待测标准品剂量2反应曲线平行性检验,即两个斜率b的差异显著性t检验,其t(b,b)皆小于t(30)0.0