电化学发光免疫测定及其临床应用

《电化学发光免疫测定及其临床应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、生物秀-专心做生物！www.bbioo.com电化学发光免疫测定及其临床应用易生物www.ebioe.com罗氏诊断.巴塞尔.瑞士易生物-领先的生物医药商务平台www.ebioe.com生物秀-专心做生物！www.bbioo.com目录第一篇电化学发光免疫测定一、化学发光反应（一）氨基苯二酰肼类参加的CL反应（二）口丫啶酯参加的CL反应（三）Dioxatene参加的CL反应（四）电化学发光反应二、电化学发光免疫测定（一）试管内的化学反应（二）流动池中的电化学发光反应三、Elecsys系列全自动电化学发光免疫分析系统（一）Elecsys1010全自动免疫分析仪（二）Elecs

2、ys2010全自动免疫分析仪（三）E170免疫分析模块第二篇临床应用第三篇检测项目一、甲状腺功能二、激素三、肿瘤标志四、心肌标志五、骨标志六、感染性疾病七、贫血八、糖尿病九、过敏反应十、药物易生物www.ebioe.com易生物-领先的生物医药商务平台www.ebioe.com生物秀-专心做生物！www.bbioo.com第一篇电化学发光免疫测定1959年Berson和Yalow建立了放射免疫分析方法（RIA），大大提高了免疫测定的敏感度。这种标记免疫测定开拓了医学检验的新领域，应用于激素、蛋白质、感染性疾病的抗原和抗体以及药物等的微量测定。由于RIA有放射性污染等缺点，不

3、少学者进行了新标记物的探索。1971年Engvall和Perlman建立了固相酶免疫测定方法（ELISA），这种非放射标记免疫测定在临床检验，特别是感染性疾病的诊断中取得了广泛应用。但是，因ELISA最后测定的是颜色的光密度，其精密度和敏感性达不到RIA水平。化学发光免疫测定（CLIA）出现于20世纪90年代。由于最后测定的是光子的量，不但对检测者无害，其敏感度和精密度均优于RIA，而且试剂稳定，并可进行全自动分析，是理想的标记免疫测定方法。1996年发展的电化学发光免疫测定（ECLIA）在发光反应中加入了电化学反应，并结合各种免疫测定的先进技术，是目前最先进的化学发光免疫

4、测定系统。一、化学发光反应在常温下，一些特定的化学反应产生的能量使其产物或反应中间态分子激发、形成电子激发态分子；当其衰退至基态时，所释放出的化学能量以可见光的形式发射，这种现象称为化学发光（chemiluminescence，CL）。能产生CL反应的物质称为化学发光剂或化学发光底物。CL反应绝大多数属于氧化反应。因为该反应能提供足够的能量使其产物分子或反应中间态分子上升至电子激发态。目前应用在免疫测定中的重要CL反应有以下几类。（一）氨基苯二酰肼类参加的CL反应这类反应需有催化剂（如过氧化物酶，POD）的参与。主要是鲁米诺（luminol）及异鲁米诺衍生物。发射光的波长为

5、375－550nm，以425nm波长为主。鲁米诺的分子结构及CL反应式如下：（二）口丫啶酯参加的CL反应：这类化学发光剂不需要催化剂的参与，在过氧化氢的稀碱溶液中即能发光。发射光的波长为430nm。反应式如下：易生物www.ebioe.com（三）Dioxatene参加的CL反应：化学发光剂为Adamantyl1,2−二氧杂环丁烷芳基（dioxatene）磷酸盐，反应需有碱性磷酸酶（AP）参与。反应式如下：易生物-领先的生物医药商务平台www.ebioe.com生物秀-专心做生物！www.bbioo.com（四）电化学发光反应：电化学发光（electro－chemilumi

6、nescence，ECL)是一种在电极表面由电化学引发的特异性2+化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光两个过程。化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3](图1）和电子供体三丙胺2+（TPA）在阳电极表面同时各失去一个电子发生氧化反应（图2）。二价的[Ru(bpy)3]被氧化成三价，后者是一种强氧++化剂。TPA被氧化成阳离子自由基TPA*（参见图2），后者很不稳定，自发地失去一个质子（H），形成自由基3+TPA*，这是一种非常强的还原剂。这两个高反应基团在电极表面迅速反应，三价的[Ru(bpy)3]被还原形成激发态的二2+3+价[Ru(bpy)3]*，能量来源于[Ru

7、(bpy)3]和TPA*之间存在的高电化学电位差。TPA*自身被氧化成二丙胺和丙醛。接着2+2+激发态的[Ru(bpy)3]*衰减成基态的[Ru(bpy)3]，同时发射一个波长620nm的光子。这一过程在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，使光信号得以增强。图1三联吡啶钌NHS2＋Ru易生物*+-H光子www.ebioe.com3+2＋TPA*RuRu+TPA*TPA＋-e-e＋图2在电极表面的ECL反应2＋2+Ru:[Ru(bpy)3]基态3＋3+Ru:[Ru(bpy)3]氧化态2＋2+Ru*:[Ru(bpy)