实验一大肠杆菌感受态细胞的制备

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1、重视班主任工作培训，不断提高工作水平。定期召开德育工作研讨会，交流班主任工作经验，研讨班级管理方法，引导班主任多采用赏识教育，尊重、信任、理解、关心学生，进一步提高班主任的事业心和责任感。加强班主任的日常管理工作，班主任工作要做到“抓在细微处，落在实效中”，随时了解掌握学生的学习、生活动态，不断学习、实践、创新、总结。要求班主任从四个方面入手开展工作：一是抓主题班会，进行正面教育；二是加大力度进行日常班级管理；三是加强对“问题生”的转化和优秀生的培养，抓两头，带中间；四是沟通家庭、学校教育，家校联合，共同努力。湖北省放射医学技术初

2、级(师)专业实践能力试题县新农保中心党支部书记个人工作总结网络文化背景下大学生思想政治教育的对策及措施gjhjhjg实验一大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒转化【实验目的】熟悉利用CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞的操作及质粒转化大肠杆菌的方法。【实验原理】当大肠杆菌生长到OD600约为0.2~0.4时，用冰冷的氯化钙低渗溶液处理大肠杆菌细胞，细胞膨胀成球形，可使大肠杆菌进入一种易于接受外源DNA的状态（感受态），处于此状态的细胞称为感受态细胞（competentcells）。此时，若在感受态细胞中加入质粒，则质粒DNA与Ca2+形成

3、的复合物粘附于细胞表面，经过42℃短暂的热激处理后，DNA与Ca2+形成的复合物进入大肠杆菌细胞，在不含抗生素的培养基中短暂培养，使转入大肠杆菌质粒上的抗生素抗性基因表达，在含相应抗生素的选择培养基上可将转化菌（含质粒）与未转化细菌分开，转化细菌经过不断分裂增殖形成菌落，而未转化的细菌则不能。【器材与试剂】1．实验仪器培养箱，恒温摇床，超净工作台，低温台式离心机，分光光度计，水浴锅，高压灭菌锅，微孔滤器（含0.22μm滤膜），酒精灯2．实验试剂氯化钠（AR），无水氯化钙（AR），蛋白胨，酵母提取物，1.0mol/LNaOH，氨苄青

4、霉素钠，琼脂粉，LB液体培养基：蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl10g，800mL蒸馏水溶解后，用NaOH溶液调pH至7.0，蒸馏水定容至1000mL，121℃高压灭菌20min；LB固体培养基：蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl10g，800mL蒸馏水溶解后，用1.0mol/LNaOH调pH至7.0，蒸馏水定容至1000mL，然后加入琼脂粉15g，121℃高压灭菌20min，分别倒入无菌培养皿。若配制选择性培养基，当温度降至60℃左右时，加入1mL氨苄青霉素溶液（100mg/mL），混匀，分别倒入无菌培养皿；CaCl2

5、溶液：准确称取无水氯化钙11.1g，用双蒸水溶解，并定容至1000mL，121℃高压灭菌20min，4℃保存；氨苄青霉素钠溶液：准确称取氨苄青霉素钠0.5g，用蒸馏水溶解并定容至5mL，用微孔滤器过滤除菌后，分装于Eppendorf管中，-20℃保存。3.实验材料E.coliDH5α,Pet-15b质粒【实验步骤】1．接种大肠杆菌单菌落于2mLLB液体培养基中，37℃振荡（约250r/min）培养过夜。2.将2mL过夜培养物转接到盛有100mL的LB液体培养基的500mL三角瓶中，37℃重视班主任工作培训，不断提高工作水平。定期召

6、开德育工作研讨会，交流班主任工作经验，研讨班级管理方法，引导班主任多采用赏识教育，尊重、信任、理解、关心学生，进一步提高班主任的事业心和责任感。加强班主任的日常管理工作，班主任工作要做到“抓在细微处，落在实效中”，随时了解掌握学生的学习、生活动态，不断学习、实践、创新、总结。要求班主任从四个方面入手开展工作：一是抓主题班会，进行正面教育；二是加大力度进行日常班级管理；三是加强对“问题生”的转化和优秀生的培养，抓两头，带中间；四是沟通家庭、学校教育，家校联合，共同努力。湖北省放射医学技术初级(师)专业实践能力试题县新农保中心党支部书

7、记个人工作总结网络文化背景下大学生思想政治教育的对策及措施湖北省放射医学技术初级(师)专业实践能力试题县新农保中心党支部书记个人工作总结网络文化背景下大学生思想政治教育的对策及措施重视班主任工作培训，不断提高工作水平。定期召开德育工作研讨会，交流班主任工作经验，研讨班级管理方法，引导班主任多采用赏识教育，尊重、信任、理解、关心学生，进一步提高班主任的事业心和责任感。加强班主任的日常管理工作，班主任工作要做到“抓在细微处，落在实效中”，随时了解掌握学生的学习、生活动态，不断学习、实践、创新、总结。要求班主任从四个方面入手开展工作：一

8、是抓主题班会，进行正面教育；二是加大力度进行日常班级管理；三是加强对“问题生”的转化和优秀生的培养，抓两头，带中间；四是沟通家庭、学校教育，家校联合，共同努力。湖北省放射医学技术初级(师)专业实践能力试题县新农保中心党支部书记个人工作总结网络文化背